HMGB1-A box基因的原核表達及其對肝損傷的保護作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文研究了HMGB1-A box基因的原核表達及其對肝損傷的保護作用。文章通過巢式RT-PCR方法從RAW264.7細胞中擴增出HMGB1A-box編碼基因，克隆于載體pMD-19T中，測序分析后亞克隆于pET-26b(+)表達載體中，構建HMGB1A-box的原核表達載體；測序證實序列正確后轉化大腸桿菌BL21，IPTG誘導4h，高效表達融合蛋白His-HMG1A-box；用重組HMGB1A-box和HMGB1或LPS一起刺激小鼠巨噬

2、樣細胞RAW264.7，12h后用ELISA方法測定上清液中TNF-α含量；用HMGB1A-box對其進行治療，在各時間點觀察肝組織病理變化、HMGB1水平及血清ALT、LPS和TNF-α水平。研究表明：1.應用基因工程手段成功構建了HMGB1A-box原核表達載體，并在人腸桿菌DE3中獲得了高效表達。重組蛋白經過Ni2+-NTA親和層析柱使純度達到80％以上，獲得的重組蛋白具有生物學活性；2.HMGB1A-box對急性肝損傷有保護作用

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