1、目的:葡萄膜炎是眼科常見的自體免疫性疾病，Th17細胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細胞亞群，在包括葡萄膜炎在內(nèi)的多種自體免疫性疾病(autoimmunedisease，AID)中發(fā)揮重要作用。間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是一種具有免疫抑制特性的多能成體干細胞，在體內(nèi)外可抑制多種免疫細胞的增殖和功能。本研究通過建立實驗性自體免疫性葡萄膜炎(experimentalautoimmuneuveoretini

2、tis，EAU)模型，觀察MSCs對EAU免疫調(diào)節(jié)作用，檢測Th17細胞及其分泌的主要炎性因子IL-17在眼部的動態(tài)變化，以闡明MSCs對EAU的免疫調(diào)節(jié)機制，為臨床治療葡萄膜炎提供新的方法和理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.MSCs培養(yǎng)：分離培養(yǎng)Wistar大鼠骨髓MSCs，流式細胞儀檢測培養(yǎng)細胞的表型。
　　2.EAU模型制作：Lewis大鼠75只，隨機實驗組70只，空白對照組5只。光感受器間維生素A類結(jié)合蛋白(in

3、terphotoreceptorretinoid-bindingprotein，IRBP)R16片段與含有結(jié)核桿菌素HR37a2.5g/L的弗氏完全佐劑(CFA)等體積混合充分乳化，單后足墊皮下注射免疫實驗組大鼠建立EAU動物模型。
　　3.MSCs治療：EAU造模后隨機分為模型對照組和MSCs治療組各35只。MSCs治療組分別于免疫的同時和EAU發(fā)病高峰期行MSCs尾靜脈注射治療，連續(xù)三天，模型對照組注射等體積PBS。
　

4、　4.臨床觀察：免疫后第4天，每日在裂隙燈顯微鏡下觀察大鼠眼部炎癥反應，并根據(jù)Caspi臨床分級進行評分。
　　5.組織病理學觀察：免疫同時治療組及模型對照組分別于免疫后第6，9，12，15，20天；EAU高峰期治療組分別于免疫后第15，20天，處死大鼠并摘除單側(cè)眼球制備視網(wǎng)膜組織切片，HE染色后行組織病理學觀察，參照Caspi組織學分級法進行評。
　　6.免疫組織化學染色：取制備好的視網(wǎng)膜切片，免疫組化SP法檢測各組相應時

5、間點視網(wǎng)膜組織中IL-17的表達。
　　7.房水采集及檢測：大鼠麻醉后，30G針頭行雙眼前房穿刺取房水，ELISA法檢測房水中IL-17的表達。
　　8.眼部浸潤細胞提取及Th17細胞和Treg細胞檢測：大鼠麻醉后，行冷PBS心臟灌注，摘除各組大鼠單側(cè)眼球，分離眼部細胞，流式細胞儀檢測CD4+IL-17+細胞和CD4+CD25+foxp3+細胞比例。
　　結(jié)果:
　　1.成功分離并鑒定MSC。
　　2.成功

6、建立EAU動物模型。
　　3.與對照組相比，免疫同時(0天)和免疫后12天行MSCs治療，大鼠眼部臨床表現(xiàn)均顯著減輕(P<0.05)；視網(wǎng)膜組織病理學改變與臨床表現(xiàn)變化一致，MSCs治療后視網(wǎng)膜炎細胞浸潤和組織結(jié)構(gòu)破壞明顯減輕，各時間點組織病理學均顯著低于模型對照組(P<0.05)。
　　4.免疫組織化學染色顯示，0天MSCs治療組于免疫后6，9，12，15，20天，12天MSCs治療組于免疫后15，20天，大鼠眼視網(wǎng)膜IL

7、-17蛋白陽性表達的平均A值均顯著低于相應模型對照組(P<0.05)。
　　5.房水IL-17ELISA檢測結(jié)果顯示：與相應模型對照組相比，0天和12天MSCs治療組相應時間點房水中IL-17表達量均明顯降低(P<0.05)。
　　6.眼部浸潤細胞流式檢測顯示，與相應模型對照組相比，0天和12天MSCs治療組相應時間點眼部Th17細胞比例均顯著降低(P<0.05)，Treg細胞比例顯著升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：