1、酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一種含銅的氧化還原酶,廣泛存在于生物體中,是生物體合成黑色素的關(guān)鍵酶,篩選天然來(lái)源的酪氨酸酶抑制劑,可以為美白化妝品或以酪氨酸酶為作用靶點(diǎn)的藥物開發(fā)提供依據(jù)。
　　 本研究對(duì)15種海洋藻類和5種海洋動(dòng)物進(jìn)行了酪氨酸酶抑制活性的篩選,結(jié)果表明海帶和菲律賓蛤仔提取物對(duì)酪氨酸酶有明顯的抑制作用。通過(guò)正交試驗(yàn)確定了這兩種海洋生物提取物的最佳提取條件,系統(tǒng)研究了提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制效果和作用機(jī)理,評(píng)

2、價(jià)了其抗紫外線催化作用等生物活性,相關(guān)研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1.建立了篩選酪氨酸酶抑制劑的反應(yīng)體系,確定以1.0mmol/L的多巴為底物,酶的終質(zhì)量濃度為3.14mg/L,反應(yīng)溫度32℃,pH6.8,反應(yīng)穩(wěn)態(tài)時(shí)間為1min,以20％DMSO水溶液為測(cè)活提取物溶劑。依據(jù)建立的篩選體系,比較了15種海洋藻類和5種海洋動(dòng)物提取物的酪氨酸酶抑制活性,發(fā)現(xiàn)海帶提取物和菲律賓蛤仔提取物對(duì)酪氨酸酶抑制活性最強(qiáng)。
　　 2.用傳統(tǒng)

3、浸提法對(duì)海帶中的酶抑制成分進(jìn)行提取,通過(guò)單次單因素實(shí)驗(yàn)與正交試驗(yàn)結(jié)合的方法對(duì)提取條件進(jìn)行了優(yōu)化。最佳提取條件為:乙醇濃度50％,提取溫度40℃,提取時(shí)間為3h,料液比為1g:12mL。乙醇提取物經(jīng)有機(jī)溶劑萃取,依次得到乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性組分,酶活抑制實(shí)驗(yàn)表明:水溶性組分對(duì)酪氨酸酶有明顯的抑制作用,其IC50約為0.16 mg/mL。進(jìn)一步動(dòng)力學(xué)分析表明,水溶性組分對(duì)酪氨酸酶具有競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制作用,抑制常數(shù)K1=0.07

4、mg/mL。定性測(cè)定結(jié)果表明:水溶性組分中具有其他兩種萃取物所不具備的酚類等物質(zhì),結(jié)合已有研究,初步判斷水溶性組分中對(duì)酩氨酸酶起抑制作用的物質(zhì)很可能是酚類。采用等毒法研究水溶性組分與熊果苷和曲酸的協(xié)同抑制作用,結(jié)果表明:水溶性組分與曲酸對(duì)抑制酪氨酸酶活性有協(xié)同作用。
　　 3.對(duì)菲律賓蛤仔提取物的最佳提取條件為:乙醇濃度95％,提取溫度50℃,提取時(shí)間為4h,料液比為1g:8mL。菲律賓蛤仔乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性組

5、分都具有較強(qiáng)的酪氨酸酶抑制作用,IC50分別為0.43mg/mL、0.63mg/mL、0.72 mg/mL。進(jìn)一步動(dòng)力學(xué)分析表明,乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物對(duì)酪氨酸酶具有非競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制作用,抑制常數(shù)分別為0.47mg/mL、0.71mg/mL。水溶性組分對(duì)酪氨酸酶具有競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制作用,抑制常數(shù)為0.31mg/mL。聯(lián)合抑制試驗(yàn)表明:乙酸乙酯萃取物與熊果苷對(duì)抑制酪氨酸酶活性有協(xié)同作用,水溶性組分與曲酸具有協(xié)同作用。
　　 4