1、針灸穴位對(duì)內(nèi)臟具有調(diào)節(jié)作用，其作用機(jī)制一直是針灸基礎(chǔ)研究中的重點(diǎn)。針刺穴位對(duì)內(nèi)臟功能的調(diào)節(jié)屬于“軀體-內(nèi)臟”反射的范疇。在針刺對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)中存在穴位特異性，以往的研究表明這與神經(jīng)節(jié)段性支配和自主神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)相關(guān)，但其在中樞的調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確。刺激不同穴位產(chǎn)生特異性的靶器官效應(yīng)，這其中必有其相應(yīng)的神經(jīng)生物學(xué)調(diào)節(jié)機(jī)制。闡明這些調(diào)節(jié)機(jī)制，將對(duì)針灸臨床選穴奠定科學(xué)基礎(chǔ)。
　　軀體與內(nèi)臟聯(lián)系的外周機(jī)制是軸突反射。在以往的研究中，對(duì)穴位與

2、內(nèi)臟的聯(lián)系較為常見的解釋是神經(jīng)節(jié)段學(xué)說。該學(xué)說很好的解釋了近節(jié)段的俞募穴與對(duì)應(yīng)內(nèi)臟疾病之間產(chǎn)生療效的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)，但對(duì)于遠(yuǎn)節(jié)段的下肢穴位（如足三里穴），其治療作用與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能完整性有關(guān)。內(nèi)臟感覺和穴位的傳入信息到達(dá)延髓后進(jìn)行整合，通過自主神經(jīng)的下行傳導(dǎo)通路對(duì)內(nèi)臟活動(dòng)進(jìn)行調(diào)節(jié)。目前的研究認(rèn)為孤束核（nucleus of solitary tract，NTS）和迷走神經(jīng)背核(dorsalmotor nucleus of vagus

3、，DMV)是接受內(nèi)臟感覺投射和調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)的最基本的核團(tuán)。
　　足三里是足陽明胃經(jīng)要穴;中脘是胃的募穴、八會(huì)穴的腑會(huì)、足陽明胃經(jīng)與任脈交會(huì)穴。這兩個(gè)穴位作為治療胃臟疾病的穴位，應(yīng)用非常廣泛。以往的研究表明針刺足三里通過激活迷走神經(jīng)引起胃運(yùn)動(dòng)的增強(qiáng)，而針刺中脘則通過同節(jié)段的交感神經(jīng)的作用引起胃運(yùn)動(dòng)的抑制。足三里和中脘穴對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的不同調(diào)節(jié)效應(yīng)在延髓可能與NTS和DMV中的胃內(nèi)臟感覺及運(yùn)動(dòng)相關(guān)的神經(jīng)元密切相關(guān)。神經(jīng)元被刺激激活的一種標(biāo)志是

4、c-fos表達(dá)，可用其分析中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元受到外周刺激后的活動(dòng)變化。本研究采用稀鹽酸(HCl)造成胃黏膜損傷模型，從形態(tài)學(xué)、電生理學(xué)的角度觀察電針刺激足三里穴或中脘穴對(duì)胃黏膜損傷大鼠延髓c-fos的表達(dá)、胃電活動(dòng)的變化以及其對(duì)NTS與DMV神經(jīng)元放電的影響，揭示電針對(duì)胃內(nèi)臟感覺和內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)影響的中樞機(jī)制，為針刺作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>　　1、胃黏膜損傷對(duì)大鼠胸髓背角和延髓NTS神經(jīng)元c-fos表達(dá)的影響及

5、針刺對(duì)其的作用。采用免疫組織化學(xué)的研究方法，明確胃黏膜損傷所產(chǎn)生的原癌基因c-fos在胸髓背角和延髓NTS中的表達(dá)，為下一步電生理學(xué)研究明確胞外放電的記錄位置。在此基礎(chǔ)上觀察電針刺激不同穴位對(duì)這些部位的神經(jīng)元c-fos表達(dá)的影響。
　　2、觀察電針足三里、中脘穴對(duì)胃黏膜損傷大鼠胃電（electrogastrogram，EGG）活動(dòng)、延髓NTS和DMV神經(jīng)元的胞外放電的影響。采用多通道陣列電極技術(shù)，記錄大鼠延髓NTS和DMV神經(jīng)元的

6、胞外放電并同步觀察胃黏膜損傷刺激信息、胃運(yùn)動(dòng)以及電針刺激不同穴位在延髓內(nèi)臟感覺和內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)中樞的加工和整合，明確電針足三里和中脘穴對(duì)胃內(nèi)臟感覺和內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)影響的中樞機(jī)制。
　　2、動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)方法
　　選用正常成年無特定病原菌（SPF，specific pathogen free）級(jí)Sprague-Dawle大鼠66只，雄性，200-250g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供。實(shí)驗(yàn)前禁食24小時(shí)以排空胃內(nèi)食物，并飼以5％葡萄糖水。用于形態(tài)學(xué)實(shí)

7、驗(yàn)的動(dòng)物為16只，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組:生理鹽水對(duì)照組（按1ml/100g體重劑量，經(jīng)胃導(dǎo)管導(dǎo)入生理鹽水）、胃黏膜損傷模型組（按1ml/100g體重劑量，經(jīng)胃導(dǎo)管導(dǎo)入0.5mol/L的HCl）、胃黏膜損傷模型+電針足三里組、胃黏膜損傷模型+電針中脘組。生理鹽水對(duì)照組和胃黏膜損傷模型組在完成灌胃后45min進(jìn)行灌流固定;胃黏膜損傷模型+電針組采用頻率為15Hz，刺激強(qiáng)度2mA的電針刺激，在HCl灌胃10min后電針干預(yù)30min，于灌胃后

8、45min進(jìn)行灌流固定。取脊髓胸段(T8-12)和延髓段，樣本經(jīng)后固定脫水處理后，進(jìn)行冰凍切片，使用免疫熒光染色的方法觀察c-fos陽性神經(jīng)元在胸髓背角和延髓NTS核團(tuán)中的表達(dá)。用于電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物為50只，隨機(jī)分為5組:電針足三里組、電針中脘組、胃黏膜損傷模型組（按1ml/100g體重劑量，經(jīng)胃導(dǎo)管導(dǎo)入0.5mol/L的HCl）、胃黏膜損傷模型+電針足三里組、胃黏膜損傷模型+電針中脘組。通過手術(shù)在大鼠胃漿膜層放置胃電記錄電極，選擇在

9、延髓c-fos表達(dá)密集的NTS區(qū)域放置多通道陣列電極，同步記錄胃電和延髓不同核團(tuán)神經(jīng)元胞外放電，通過觀察正常生理狀態(tài)下電針前后胃電指標(biāo):胃平滑肌細(xì)胞放電(gastric myoelectrical activity，GMA)的頻率（簇/分，cluster per minute）和胃電慢波(gastric slow wave，GSW)的積分(mV·sec)的改變，胃黏膜損傷前后胃電和神經(jīng)元放電頻率的改變以及胃黏膜損傷后電針足三里或中脘穴干

10、預(yù)前后胃電和神經(jīng)元放電頻率的改變，觀察分析電針足三里或中脘穴在胃黏膜損傷模型中對(duì)胃內(nèi)臟感覺和內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)核團(tuán)的作用機(jī)制。
　　3、結(jié)果
　　3.1急性胃黏膜損傷大鼠胸髓背角和延髓NTS神經(jīng)元c-fos表達(dá)的影響及電針足三里、中脘的作用
　　3.1.1急性胃黏膜損傷對(duì)大鼠脊髓背角神經(jīng)元c-fos表達(dá)的影響
　　胃黏膜損傷模型組在T10節(jié)段脊髓背角中c-fos免疫陽性反應(yīng)神經(jīng)元主要分布在Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ板層，可以看到呈深染的細(xì)

11、胞核，胞漿也有染色。急性胃黏膜損傷對(duì)大鼠胸髓節(jié)段背角神經(jīng)元的c-fos表達(dá)沒有顯著影響(P＞0.05，n=4)。
　　3.1.2急性胃黏膜損傷對(duì)延髓NTS區(qū)神經(jīng)元c-fos表達(dá)的影響及電針足三里、中脘的作用
　　急性胃黏膜損傷后，c-fos免疫陽性反應(yīng)神經(jīng)元NTS聯(lián)合核和內(nèi)側(cè)亞核出現(xiàn)，其中在聯(lián)合核和內(nèi)側(cè)亞核尾端密集表達(dá)，在聯(lián)合核和內(nèi)側(cè)亞核頭端少量表達(dá)。而急性胃黏膜損傷導(dǎo)致延髓NTS中內(nèi)側(cè)亞核尾端c-fos免疫陽性反應(yīng)的神經(jīng)元

12、較生理鹽水組相比明顯增多(P＜0.01，n=4)。電針足三里、中脘穴均可減少延髓NTS區(qū)急性胃黏膜損傷所產(chǎn)生c-fos表達(dá)，電針足三里穴的所產(chǎn)生的效應(yīng)明顯優(yōu)于電針中脘穴(P＜0.05，n=4)。
　　3.2電針足三里、中脘穴對(duì)大鼠胃電的影響
　　電針足三里穴后，正常大鼠GMA頻率明顯增加(P＜0.05，n=7)，GSW積分明顯增加(P＜0.05，n=9)。說明電針足三里穴可以顯著增強(qiáng)胃運(yùn)動(dòng)。
　　電針中脘穴后，正常大鼠

13、GMA頻率為明顯減少(P＜0.05，n=7)，GSW積分明顯減少(P＜0.05，n=10)。說明電針中脘穴對(duì)胃運(yùn)動(dòng)有明顯的抑制效應(yīng)。
　　3.3急性胃黏膜損傷對(duì)大鼠胃電、NTS和DMV神經(jīng)元放電的影響及電針足三里、中脘的作用
　　3.3.1急性胃黏膜損傷對(duì)大鼠胃電的影響及電針足三里、中脘的作用
　　在急性胃黏膜損傷90s后大鼠GMA頻率較損傷明顯增多(P＜0.01，n=7);其GSW積分明顯增大(P＜0.01，n=7)

14、。急性胃黏膜損傷5min后大鼠GMA頻率明顯減少(P＜0.01，n=7);GSW積分顯著增大(P＜0.05，n=7)。急性胃黏膜損傷30min后大鼠GMA頻率明顯減少(P＞0.05，n=7); GSW積分相比無顯著差異。說明急性胃黏膜損傷可以導(dǎo)致胃運(yùn)動(dòng)的顯著增強(qiáng)且持續(xù)約30min。
　　急性胃黏膜損傷可以引起胃運(yùn)動(dòng)的增強(qiáng)，而電針可以抑制這種傷害性增強(qiáng)。在損傷10min后，電針足三里后GSW積分較電針前明顯減少(P＜0.05，n=1

15、0)而在損傷10min后，電針中脘穴后GSW積分較電針前也明顯減少(P＜0.05，n=10)。說明電針足三里或中脘對(duì)急性胃黏膜損傷導(dǎo)致的胃運(yùn)動(dòng)的增強(qiáng)有抑制作用，且兩個(gè)穴位的抑制作用無差異。
　　3.3.2急性胃黏膜損傷對(duì)大鼠NTS神經(jīng)元放電的影響及電針足三里、中脘的作用
　　實(shí)驗(yàn)共記錄到NTS中對(duì)急性胃黏膜損傷有反應(yīng)的神經(jīng)元細(xì)胞（前后放電頻率變化率超過30％的細(xì)胞）61個(gè)，其中興奮性神經(jīng)元54個(gè)（占88.5％），對(duì)抑制性神經(jīng)

16、元7個(gè)（占11.5％）。NTS中存在對(duì)胃黏膜損傷興奮的神經(jīng)元，在胃黏膜損傷1 min后和5min后其放電頻率均顯著增多(P＜0.01，n=54);急性胃黏膜損傷47min后其放電頻率與損傷前相比無差異(P＞0.05，n=54)。說明急性胃黏膜損傷可以導(dǎo)致NTS神經(jīng)元放電的改變，而且這種傷害性刺激持續(xù)一段時(shí)間后恢復(fù)。
　　電針足三里或中脘穴均可抑制急性胃黏膜損傷大鼠NTS中興奮性神經(jīng)元放電活動(dòng)。急性胃黏膜損傷10min后，電針足三里

17、穴，NTS興奮性神經(jīng)元放電頻率與電針前相比明顯減少(P＜0.05，n=46);電針中脘穴，NTS興奮性神經(jīng)元放電頻率與電針前相比明顯減少，(P＜0.05，n=33)。電針足三里對(duì)NTS興奮性神經(jīng)元放電的抑制率為67.64±4.11％，電針中脘對(duì)NTS興奮性神經(jīng)元放電的抑制率為48.47±3.43％，說明足三里的抑制作用顯著優(yōu)于中脘（P＜0.05）。
　　3.3.3急性胃黏膜損傷對(duì)大鼠DMV神經(jīng)元自發(fā)放電的影響及電針足三里、中脘的作

18、用
　　實(shí)驗(yàn)共記錄到DMV中對(duì)急性胃黏膜損傷的反應(yīng)即損傷前后放電頻率變化率均不超過30％，因此不能其改變沒有生理學(xué)意義。
　　4、結(jié)論
　　1.0.5mol/L的鹽酸造成胃黏膜損傷導(dǎo)致延髓NTS的聯(lián)合核和內(nèi)側(cè)亞核c-fos陽性神經(jīng)元表達(dá)顯著增加，電針足三里穴可以抑制NTS神經(jīng)元中c-fos蛋白的表達(dá)，且抑制作用明顯優(yōu)于電針中脘穴。
　　2.急性胃黏膜損傷的傷害性刺激所產(chǎn)生反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間大約為30min，在此期間胃