1、本試驗(yàn)提取禽呼腸孤病毒(ARV)內(nèi)蒙古、天津地區(qū)分離株(ARV C-98、ARV T-98)病毒RNA，參考GenBank中禽呼腸孤病毒M1、M2、M3基因序列設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增M基因的四對(duì)引物，分別為M1-1、M1.2、M2、M3。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)增ARV C-98、ARV T-98分離株的M1、M2、M3基因。將純化的目的DNA與PIVID19-T載體連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，提取質(zhì)粒，用PCR法、酶切法鑒定，將鑒定為含有陽性質(zhì)

2、粒的菌液送寶生物工程(大連)有限公司測(cè)定基因序列。測(cè)序結(jié)果表明:ARVC-98、ARV T-98毒株M1、M2、M3基因序列全長(zhǎng)分別為2283bp、2158bp、1996bp，編碼由732、676和635個(gè)氨基酸組成的μA、μB及μN(yùn)S蛋白，測(cè)定核苷酸序列已登錄GenBank。基因組非編碼區(qū)包含禽呼腸孤病毒和哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒共有的5'GCTTTT、3'TCATC的保守序列。M1基因的5'和3'包含12bp和72bp的非編碼區(qū)域；M2基

3、因的5'和3'包含29bp和98bp的非編碼區(qū)域；M3基因的5'和3'包含24bp和64bp的非編碼區(qū)域。 應(yīng)用計(jì)算機(jī)軟件將測(cè)定序列與參考序列的核苷酸的同源性進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)ARV C-98、ARV T-98毒株的M1基因與ARV 2408、ARV 1733、ARV S1133三個(gè)毒株的同源性最高，為99.5％～99.7％；與ARV 176毒株的同源性次之，為98.1％～98.2％；與ARV OS161、ARV 138、ARV

4、 1017-1、ARV 918、ARV 916SI毒株的同源性較低，為88.0％～92.2％；與番鴨呼腸孤病毒(DRV)參考毒株核苷酸同源性為69.5％～69.7％；與哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒(MRV)參考毒株核苷酸同源性最低，約為28％。ARV C-98、ARV T-98毒株的M2基因與ARV 2408、ARV S1133、ARVl701-1、ARV 1733四個(gè)毒株的同源性最高，為99.4％～99.6％；與ARV 176毒株的同源性次之，

5、為95.8％；與ARV OSl61、ARV 918、ARV 916SI、ARV 601G毒株的同源性較低，為71.3％～73.3％；與DRV參考毒株核苷酸同源性為63.6％～63.7％:與MRV參考毒株的同源性最低，為40.3％。ARV C-98、ARV T-98毒株的M3基因與ARV2408、ARV 1733、ARV S1133、ARV 176四個(gè)毒株的同源性最高，為98.3％～99.8％:與ARV 138、ARV OS161毒株M3