1、目的：分離獲取高產(chǎn)量、高活性、高純度的肝星狀細(xì)胞。 方法：用原位循環(huán)灌流法，密度梯度離心法分離純化大鼠的肝星狀細(xì)胞，用含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞并傳代。 結(jié)果：肝星狀細(xì)胞得率為3×107個/鼠，純度大于97％，存活率大于92％。 結(jié)論：分離出的大鼠肝星狀細(xì)胞產(chǎn)量高、活性好、純度高。 目的：研究丹參素對肝星狀細(xì)胞蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表達(dá)的影響，探討丹參素抗肝纖維化的

2、機制。 方法：采用原位循環(huán)灌流法提取Wistar大鼠的肝星狀細(xì)胞，在肝星狀細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)分別加入不同濃度的丹參素和渥曼青霉素在體外培養(yǎng)24小時后，用MTT法觀察丹參素以及渥曼青霉素對肝星狀細(xì)胞增殖的抑制作用。用流式細(xì)胞儀觀察丹參素和渥曼青霉素對肝星狀細(xì)胞周期的影響。Western Blot方法檢測不同濃度丹參素和渥曼青霉素作用后的肝星狀細(xì)胞中Akt和p-Akt的表達(dá)情況。 結(jié)果：MTT檢測表明濃度為0.0625mmol/L

3、，0.125mmol/L，0.25mmol/L的丹參素對肝星狀細(xì)胞增殖的抑制作用依次增強，濃度為20nmol/L，40 nmol/L，60 nmol/L，的渥曼青霉素對肝星狀細(xì)胞增殖的抑制作用也依次增強。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示丹參素和渥曼青霉素使G1期肝星狀細(xì)胞增多，S期肝星狀細(xì)胞減少，肝星狀細(xì)胞停滯于G1期。Western blot檢測出丹參素和渥曼青霉素對肝星狀細(xì)胞中Akt蛋白的表達(dá)沒有明顯影響，但是不同濃度的丹參素和渥曼青霉素作用