1、本研究選擇了PRRSVCH-1a株致弱過程中的4個不同代次進行了全基因組序列的測定與分析，并進行了PRRSVCH-1R全長cDNA分子克隆的構(gòu)建。 PRRSVCH-1a致弱過程中的4個代次分別命名為P39，P71，P148和P171，并對這4個代次進行了全基因組序列的測定。應(yīng)用相關(guān)的分子生物學(xué)軟件對其序列及其編碼產(chǎn)物進行了分析。序列測定結(jié)果表明，PRRSVCH-1a株致弱過程中4個不同代次的Nsp2蛋白和3'UTR區(qū)域的變異相對

2、較大，尤其是Nsp2蛋白的變異，該蛋白可能具有種屬特異性功能，具有耐受堿基插入、缺失和變異的能力。同祖代毒CH-1a株相比，4個代次的Nsp2蛋白存在多處核苷酸的改變，同時位于3'UTRpoly(A)尾巴的上游的高度保守的八核苷酸序列較祖代毒也發(fā)生了改變，該基元序列對RdRp的識別及病毒復(fù)制的啟動可能起著重要的作用，其生物學(xué)意義有待進一步驗證。 設(shè)計并合成了覆蓋PRRSVCH-1R株基因組的七對引物，采用RT-PCR方法，分別擴

3、增各基因片段。通過沉默突變引入一個分子標(biāo)記(NheI識別位點)以便于將來區(qū)分自然毒株和基因工程毒株。利用限制性內(nèi)切酶，分別消化各基因擴增片段和pBluescriptⅡSK(+)載體，構(gòu)建PRRSVCH-1R株基因組的全長cDNA分子克隆(pB1-CH-1R)。采用PCR、限制性內(nèi)切酶酶切法和基因組測序法對pB1-CH-1R進行鑒定，結(jié)果表明已成功構(gòu)建了PRRSVCH-1R株的全長cDNA分子克隆。它不僅含有PRRSVCH-1R株的全基因