1、目的：
　　觀察黃芪注射液聯(lián)合大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞（rat mesenchymal stem cells,rMSCs）移植以及兩種不同移植途徑對(duì)大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，以促進(jìn)間質(zhì)干細(xì)胞研究向臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化，為間質(zhì)干細(xì)胞早日應(yīng)用于小兒復(fù)雜神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供科學(xué)依據(jù)，并為中醫(yī)藥在這一領(lǐng)域的研究和應(yīng)用進(jìn)行有益的探索。
　　方法：
　　以Rice方法制作缺氧缺血性腦損傷大鼠模型，按實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌謨刹糠诌M(jìn)行。

2、r>　　1.黃芪聯(lián)合rMSCs移植對(duì)缺氧缺血性腦損傷大鼠的治療：造模后3d治療組經(jīng)腦局部注射經(jīng)BrdU標(biāo)記的rMSCs(2.5-5×105cell)，或同時(shí)腹腔注射黃芪注射液(1.2ml/100g)，對(duì)照組則僅注射黃芪注射液或腦局部注射PBS液。
　　2.兩種不同移植途徑對(duì)rMSCs修復(fù)缺氧缺血性腦損傷作用的比較研究：造模后3d治療組經(jīng)腦局部注射經(jīng)BrdU標(biāo)記的rMSCs（2.5-5×105cell）或尾靜脈注射經(jīng)BrdU標(biāo)記的

3、rMSCs（5-6×106cell）或同時(shí)腹腔注射黃芪注射液(1.2ml/100g)，對(duì)照組則經(jīng)腦局部或尾靜脈注射PBS液。兩部分大鼠均在造模后24d或移植后21d行Morris水迷宮行為學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力，進(jìn)一步取腦組織作HE染色觀察腦損傷病理改變和修復(fù)情況，應(yīng)用雙標(biāo)免疫組化技術(shù)檢測(cè)經(jīng)BrdU標(biāo)記的rMSCs的膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibriallary acidicprotein,GFAP）和神經(jīng)原特異性烯醇化酶（

4、Neuron Specific Enolase，NSE）表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　大鼠造模存活率為93.44％。
　　1.黃芪聯(lián)合rMSCs移植對(duì)缺氧缺血性腦損傷大鼠的治療：在Morris水迷宮試驗(yàn)中，腦rMSCs加黃芪組在各時(shí)間點(diǎn)的平均潛伏期均低于腦rMSCs組，除第1、6d兩者平均時(shí)間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）外，其余各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有顯著性差異（P＜0.05）；穿越平臺(tái)次數(shù)高于腦rMSCs組，但無(wú)顯著性差異（P＞

5、0.05）。腦組織病理切片觀察到腦rMSCs加黃芪組較腦rMSCs組的腦組織水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕更明顯，膠質(zhì)細(xì)胞增生更活躍。雙標(biāo)免疫組化顯示腦rMSCs加黃芪組中GFAP、NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目均較腦rMSCs組增多，并有顯著性差異（P＜0.05）。
　　2.兩種不同移植途徑對(duì)rMSCs修復(fù)缺氧缺血性腦損傷作用的比較研究：大鼠Morris水迷宮行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果示不同移植途徑之間潛伏期平均時(shí)間比較，除第1d尾rMSCs組高于腦rMSCs

6、組、尾rMSCs加黃芪組低于腦rMSCs加黃芪組，第5d尾rMSCs組低于腦rMSCs組，且有顯著性差異（P＜0.05）外，其余時(shí)間點(diǎn)各組均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；腦rMSCs組穿越平臺(tái)次數(shù)高于尾rMSCs組，腦rMSCs加黃芪組穿越平臺(tái)次數(shù)高于尾rMSCs加黃芪組，但均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。腦組織病理切片觀察到兩種移植途徑治療效果相似。雙標(biāo)免疫組化則顯示兩種移植途徑的大鼠腦組織內(nèi)都可見(jiàn)BrdU標(biāo)記的陽(yáng)性rMSCs存活，并

7、且經(jīng)靜脈移植的細(xì)胞分布相對(duì)廣泛；腦局部移植的細(xì)胞隨著時(shí)間的推移不斷遷移；腦rMSCs組GFAP、NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較尾rMSCs組多，但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；加用黃芪后腦定位移植途徑的GFAP、NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著高于尾rMSCs加黃芪組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　對(duì)大鼠缺氧缺血性腦損傷模型采用黃芪注射液聯(lián)合腦局部 rMSCs移植后，與腦 rMSCs組相比，大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力有所改善，腦組織病理顯示受損腦組織

8、恢復(fù)更明顯，雙標(biāo)免疫組化顯示GFAP、NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增多，提示黃芪注射液能夠在體內(nèi)誘導(dǎo)rMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化，同時(shí)具有協(xié)同MSCs修復(fù)損傷腦組織的作用。采用經(jīng)腦定位和靜脈兩種不同rMSCs移植途徑治療缺氧缺血性腦損傷大鼠，比較研究后發(fā)現(xiàn)兩者學(xué)習(xí)、記憶能力的改善無(wú)顯著性差異，病理及雙標(biāo)免疫組化結(jié)果亦無(wú)顯著性差異，提示兩種移植途徑具有同樣促進(jìn)缺氧缺血性腦損傷模型大鼠神經(jīng)損傷恢復(fù)的作用，但從臨床實(shí)際出發(fā)，尾靜脈途徑更具有臨床應(yīng)用價(jià)值。