1、由大豆疫霉菌引起的根腐病是影響世界大豆生產(chǎn)的毀滅性病害之一，利用抗病品種是控制該病害最經(jīng)濟(jì)和有效的措施。然而，由于大豆疫霉菌小種的高度變異性導(dǎo)致品種抗性極易喪失，挖掘持久性抗病基因己成為抗病育種的難題。因此，找到非寄主對大豆疫霉菌抗性反應(yīng)的關(guān)鍵基因，就可能利用基因工程手段創(chuàng)造廣譜和持久的抗性材料。本研究的目的就是尋找非寄主煙草對大豆疫霉菌信號識(shí)別和抗性反應(yīng)相關(guān)的基因，為從分子水平上解釋非寄主對大豆疫霉菌抗性的機(jī)理提供依據(jù)。本研究獲得了以

2、下主要結(jié)果： 1.為尋找大豆疫霉激發(fā)素(Elicitin)蛋白的受體，構(gòu)建了用于酵母雙雜交系統(tǒng)的“誘餌”載體，并檢測其是否具有毒性和自激活作用。通過PCR從含大豆疫霉激發(fā)素基因的TOPO質(zhì)粒中擴(kuò)增出目的片段，并將目的片段按正確方向插入誘餌載體PGBKT7中，重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌株AH109，檢測其表達(dá)產(chǎn)物對酵母細(xì)胞中的報(bào)告基因有無激活作用以及對酵母有無毒性。結(jié)果表明含激發(fā)素蛋白的誘餌載體對酵母菌株AH109的報(bào)告基因無自激活作用，

3、且對酵母細(xì)胞無毒性。該研究為進(jìn)一步從植物cDNA文庫篩選尋找與激發(fā)素相互作用的受體蛋白奠定了基礎(chǔ)。 2.以普通煙草k326為材料，用SMARTTMcDNA Library Construction Kit合成煙草cDNA。提取RNA與合成產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測表明：提取的總RNA比較完整，純度較高。LD-PCR產(chǎn)物主要集中在0.5～5kb之間，符合構(gòu)建文庫要求。 3.利用酵母雙雜交技術(shù)從煙草中篩選了與類激發(fā)素PPSE7和激發(fā)素S

4、OJB互作的蛋白。PPSE7和SOJB分別從煙草篩選出了11個(gè)和14個(gè)蛋白；PPSE7和SOJB在煙草中存在幾個(gè)相似的結(jié)合蛋白，表明二者具有共享的生物功能。在煙草中，SOJB能與蛋白質(zhì)降解有密切關(guān)系的兩個(gè)蛋白一肽酶和泛素結(jié)合蛋白互作，而PPSE7沒有篩選到類似蛋白，這與本研究中SOJB的作用相符。SOJB和PPSE7均能與跨膜運(yùn)輸?shù)鞍捉Y(jié)合，PPSE7與水通道蛋白，SOJB則與銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白互作，表明二者在胞質(zhì)內(nèi)存在作用靶標(biāo)。 4