1、大豆疫病(Phytophthorasojae)是嚴重危害大豆生產(chǎn)的毀滅性病害。該病1948年首先在美國發(fā)現(xiàn)，目前已傳播至數(shù)十個國家，廣泛分布于世界上大部分大豆產(chǎn)區(qū)，每年對全球的大豆產(chǎn)業(yè)造成的損失高達10億美元。近年，大豆已經(jīng)成為我國進口量最大的農(nóng)產(chǎn)品，我國每年進口大豆1000～2000萬噸，金額達數(shù)十億美元，幾乎相當于我國大豆的產(chǎn)量。其中進口量最高的國家是美國，其次是阿根廷和巴西。我國自1986年起將大豆疫病列為對外檢疫對象。　　本研

2、究應用基因芯片這一高通量檢測技術對大豆疫霉菌及其相關種，包括：煙草疫霉(Phytophthoranicotianae)、辣椒疫霉(Phytophthoracapsici)、苧麻疫霉(Phytophthorabochmeniae)、寄生疫霉(Phytophthoraparasitica)、大豆霜霉(Peronosporamanschurica)、大雄疫霉(Phytophthoramegasperma)、瓜果腐霉(Pythiumaphani

3、dermatum)、群結(jié)腐霉(Pythiummyriothlum)、側(cè)雄腐霉(Pythiumparoecandrum)共10個種27個菌株開展了研究?！　≡谘芯恐?，通過對大豆疫霉菌及其相關種DNA序列的查找、比較與分析；進而對大豆疫霉菌及其相關種通用引物、大豆疫霉菌特異性探針及大豆疫霉菌及其相關種通用探針進行設計與合成，在此基礎上，制備了大豆疫霉菌檢測基因芯片。在大豆疫霉菌基因芯片的檢測中，對大豆疫霉菌及其相關種通用引物應用單重PCR

4、、雙重PCR、三重PCR進行篩選，并進行了反應體系的優(yōu)化；在基因芯片雜交前，進行了基因芯片雜交條件的篩選；應用篩選出的三重PCR體系對大豆疫霉菌及其相關種進行擴增，在優(yōu)化后的雜交條件下進行了大豆疫霉菌特異性探針和大豆疫霉菌及其相關種通用探針的特異性和穩(wěn)定性實驗；大豆疫霉菌及其相關種基因芯片檢測技術的靈敏度實驗及單個孢子基因芯片檢測實驗?！　⊥ㄟ^研究，自行設計和合成了大豆疫霉菌基因芯片檢測探針44條、引物10對，從中廣泛篩選出大豆疫霉菌

5、檢測特異性探針7條，大豆疫霉菌及其相關種檢測通用探針2條，通用引物3對。首次建立了大豆疫霉菌基因芯片檢測的三重PCR體系，和相應的檢測程序。優(yōu)化出大豆疫霉菌基因芯片檢測雜交溫度和雜交液，最佳溫度為42℃，最適雜交液的配方為：5×SSPE、2％SDS。在此基礎上，首次建立了大豆疫霉菌基因芯片檢測方法。該方法特異性強，所制備的芯片能特異性地檢測大豆疫霉菌；靈敏度高，為達0.2pg/μL；低通量，能對大豆疫霉菌不同基因的多個物種特異性DNA片

6、斷或多個堿基位點進行一次性同時檢測；能對大豆疫霉與其他菌在一些DNA片斷中僅存在單個堿基差別的檢測。本研究還對大豆疫霉菌單個卵孢子基因芯片檢測方法進行了探索研究，初步建立了單個卵孢子基因芯片檢測方法，使國境口岸在截獲一個至少量卵孢子的情況下，也能開展對大豆疫霉菌的檢測?！　”狙芯克⒌拇蠖挂呙咕蛐酒瑱z測方法與傳統(tǒng)土壤誘集所進行的形態(tài)學鑒定方法相比，檢測時間明顯縮短，從25天左右，縮短至一周，如從土壤中直接發(fā)現(xiàn)卵孢子，則可縮短至2