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![八種禽類病毒基因芯片檢測(cè)技術(shù)初步研究.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/004eb1fa-cbbc-4c09-88f5-538795694fa1/004eb1fa-cbbc-4c09-88f5-538795694fa11.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、家禽養(yǎng)殖是我國(guó)畜牧業(yè)的重要支柱,隨著養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展,各種禽類疾病特別是傳染性的病毒疾病不斷出現(xiàn),嚴(yán)重的困擾著我國(guó)家禽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。新城疫、禽流感、禽傳染性支氣管炎、禽傳染性法氏囊病、禽白血病、馬立克氏病、禽痘以及減蛋綜合癥是禽養(yǎng)殖業(yè)中八種重要的病毒性疾病。建立這八種病毒的檢測(cè)技術(shù),來(lái)加強(qiáng)對(duì)這些病毒引起的禽病的流行動(dòng)態(tài)及分布研究,對(duì)于有效的預(yù)防這些病毒性疾病,促進(jìn)家禽養(yǎng)殖的健康發(fā)展,減少其經(jīng)濟(jì)損失具有極為重要的意義。
2、DNA微陣列是上世紀(jì)90年代出現(xiàn)的一種基于核酸雜交的檢測(cè)技術(shù),具有具有高通量,快速,微量化,平行化等其他技術(shù)無(wú)法比擬的特點(diǎn),被廣泛的應(yīng)用于致病微生物的快速診斷上。本論文希望針對(duì)這八種禽類病毒建立DNA微陣列檢測(cè)技術(shù),為禽病的防治和診斷提供有效手段和技術(shù)措施。
本論文首先根據(jù)馬立克氏病毒、禽痘病毒以及減蛋綜合癥病毒這三種DNA病毒的基因保守序列,設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增三種病毒基因保守片段并克隆后,將單酶切產(chǎn)物作為捕捉探針。將捕
3、捉探針以高溫烘烤結(jié)合紫外交聯(lián)的方式固定在尼龍膜上。再通過(guò)多重PCR摻入Cy5-dCTP對(duì)待檢標(biāo)本中三種DNA病毒進(jìn)行標(biāo)記。與固定在尼龍膜上的捕捉探針進(jìn)行雜交。雜交完畢后再用Odyssey近紅外成像系統(tǒng)中檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明三種病毒檢測(cè)靈敏度在104拷貝至105拷貝之間。該方法不僅可以對(duì)單一病毒進(jìn)行檢測(cè),而且對(duì)兩種病毒或三種病毒混合感染也能同步進(jìn)行檢測(cè)。
再根據(jù)新城疫病毒、禽流感病毒、禽傳染性支氣管炎病毒、禽傳染性法氏囊病毒、
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