1、目的:胰島β細(xì)胞分泌功能障礙是糖尿病主要發(fā)病機(jī)制之一。研究發(fā)現(xiàn)，胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide-1，GLP-1)及其長(zhǎng)效類似物艾塞那肽(Exendin-4，Ex-4)在改善β細(xì)胞分泌功能障礙方面有顯著的效應(yīng)，但其確切機(jī)制目前仍不清楚。鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性絲氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase，CASK)，以往被認(rèn)為是一種細(xì)胞骨架蛋

2、白，但近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，CASK在神經(jīng)元中參與了細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)傳導(dǎo)、核內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)及突觸后膜興奮性等多種生理學(xué)過(guò)程，尤其是在神經(jīng)遞質(zhì)囊泡分泌方面，CASK發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。前期的研究發(fā)現(xiàn)，CASK在胰島β細(xì)胞中呈高表達(dá)，但目前功能尚不明。本研究擬利用體外培養(yǎng)的大鼠胰島β細(xì)胞系INS-1，初步探討CASK是否參與了Ex-4誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞胰島素釋放過(guò)程及可能的參與機(jī)制。
　　方法:1.體外培養(yǎng)大鼠INS-1細(xì)胞，利用定量PCR

3、、Western blot及免疫熒光檢測(cè)INS-1細(xì)胞內(nèi)CASK的mRNA、蛋白水平及胞內(nèi)定位情況。2.利用RNA干擾技術(shù)抑制CASK的表達(dá)。3.通過(guò)葡萄糖刺激胰島素釋放試驗(yàn)(GSIS)來(lái)檢測(cè)INS-1細(xì)胞分泌功能，并用放射免疫法測(cè)定胰島素含量。
　　結(jié)果:1.CASK在大鼠胰島β細(xì)胞系INS-1、小鼠胰島β細(xì)胞系MIN6及大鼠原代胰島中均有豐富的表達(dá);CASK在INS-1中主要定位于細(xì)胞質(zhì)。2.干擾CASK后，可明顯抑制濃度梯度

4、下Ex-4誘導(dǎo)的胰島素分泌(P＜0.01)。3.濃度梯度下Ex-4可明顯促進(jìn)CASK mRNA及蛋白水平的表達(dá)（P＜0.01），但對(duì)其在核內(nèi)及核外的定位無(wú)明顯影響。4.PKA阻滯劑H-89可部分阻斷Ex-4促CASK表達(dá)作用(P＜0.01)，而Epac2激動(dòng)劑ESCA-AM并不能改變Ex-4對(duì)CASK的促表達(dá)作用（P＞0.05）。
　　結(jié)論:1.CASK參與了Ex-4誘導(dǎo)的胰島素分泌過(guò)程。2.Ex-4可促進(jìn)CASK的表達(dá)，從而正向