1、目的:胰腺癌是人類常見的腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率逐年上升。目前外科手術結合化療和放療的綜合治療是胰腺癌的主要治療手段，但預后尚不理想。因此，尋找胰腺癌新的治療靶點是人們目前研究的方向之一。泛素特異性蛋白酶22(Ubiquitin-specific protease22， USP22)是轉錄調節(jié)組蛋白乙?；瘡秃象wSAGA的組成部分，與基因轉錄的調控相關，并且與癌癥的發(fā)展、轉移以及預后具有密切的聯(lián)系。自噬是細胞的自我降解，既能促進細胞生存也

2、能導致細胞死亡，胰腺癌中自噬水平高于其他上皮惡性腫瘤。LC3(Microtubule-associate protein1 lightchain3)是組成自噬小體的結構和調節(jié)蛋白，被用來檢測細胞的自噬。USP22與自噬對癌癥的發(fā)生發(fā)展都有一定的作用，但是兩者之間的關系尚不清楚。本實驗通過研究胰腺癌組織中USP22與自噬的相關性及其對預后的影響，胰腺癌細胞Panc-1中USP22對自噬的影響，觀察USP22及自噬對Panc-1細胞生存能力

3、的影響，探索USP22對胰腺癌細胞的分子生物學機制，為胰腺癌的臨床治療提供理論基礎。
　　方法:利用石蠟包埋法對胰腺癌及癌旁組織進行切片，用免疫組化檢測各組織中USP22、LC3蛋白的表達情況，并查閱病歷，隨訪，分析USP22、自噬及胰腺癌患者預后的相關性。
　　傳代培養(yǎng)胰腺癌Panc-1細胞株，取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。利用脂質體法將USP22過表達質粒/USP22干擾質粒轉染胰腺癌Panc-1細胞株，獲得USP22過表

4、達Panc-1細胞/和USP22干擾Panc-1細胞。將細胞分為三組，分別為USP22過表達組、USP22干擾組及空白對照組，用western blot、免疫熒光、電鏡等方法檢測USP22與自噬的關系。利用細胞通路抑制劑LY294002（PI3K抑制劑）及PD98059（ERK1/2抑制劑）抑制信號通路，western blot法檢測USP22影響自噬的信號通路。自噬抑制劑3-MA抑制自噬，用流式細胞儀、CCK-8、DCFH-DA法檢測

5、USP22及自噬對胰腺癌細胞增殖、凋亡、化療藥物抵抗、營養(yǎng)缺乏抵抗的影響。
　　結果:胰腺癌組織USP22及LC3蛋白表達明顯高于癌旁組織(P=0.000，P=0.011)，胰腺癌組織中USP22與LC3的表達密切相關(ρ=0.385，P=0.001)，且USP22與LC3的高表達導致胰腺癌患者預后較差(P=0.012，P=0.004)。USP22與胰腺癌的分化程度、淋巴轉移、外周侵襲、癌癥分期相關，而自噬相關蛋白LC3與分化程度

6、、淋巴轉移、癌癥分期相關(P＜0.05)。
　　Panc-1細胞USP22過表達組自噬相關蛋白LC3表達高于對照組及USP22干擾組，而自噬底物蛋白SQSTM1表達降低，Beclin1無明顯變化，且USP22的過表達使胰腺癌細胞中酸性物質、溶酶體、自噬小體數(shù)量增多。磷酸化ERK1/2的抑制可使自噬水平下降，而磷酸化AKT的抑制對自噬水平無顯著影響。USP22的表達及自噬水平升高可使胰腺癌細胞增殖、化療藥物抵抗、營養(yǎng)缺乏抵抗能力增加