1、1三氧化二砷抑制鼻咽癌細(xì)胞三氧化二砷抑制鼻咽癌細(xì)胞EBEB病毒潛伏膜蛋白病毒潛伏膜蛋白1及其抗癌效應(yīng)的研究及其抗癌效應(yīng)的研究20032003級(jí)博士生博士生杜彩文杜彩文導(dǎo)師溫博貴教授溫博貴教授汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理與病理生理學(xué)系病理教研室ARSENICTRIOXIDEDOWNREGULATEEPSTEINBARRVIRUSENCODEDLATENTMEMBRANEPROTEIN1ITSANTICANCERACTIVITYINNASOPHARY

2、NGEALCARCINOMACELLSPH.D.CIDATE:CAIWENDUSUPERVIS:PROF.BOGUIWENPATHOLOGICSECTIONDEPARTMENTOFPATHOLOGYPATHOPHYSIOLOGYOFSHANTOUUNIVERSITYMEDICALCOLLEGE基金資助基金資助李嘉誠(chéng)汕頭大學(xué)研究發(fā)展基金（李嘉誠(chéng)汕頭大學(xué)研究發(fā)展基金（L03002）3摘要研究背景和目的研究背景和目的:鼻咽癌與EB病毒感染關(guān)系

3、密切，EB病毒編碼的潛伏膜蛋白(LMP1)在鼻咽癌的形成和發(fā)展起著重要作用：阻斷分化、抑制凋亡、促進(jìn)轉(zhuǎn)移。在我們的前期工作中表明傳統(tǒng)中藥三氧化二砷（As2O3）能夠誘導(dǎo)鼻咽癌移植瘤分化與凋亡。但是該藥的作用機(jī)制是否涉及抑制LMP1目前仍不清楚，值得我們作進(jìn)一步的研究。為此本論文分二部分對(duì)上述問(wèn)題進(jìn)行研究:首先是研究As2O3是否抑制LMP1的表達(dá)及其在鼻咽癌細(xì)胞凋亡中所起的作用；然后是探討經(jīng)As2O3處理后殘留細(xì)胞潛在轉(zhuǎn)移能力及與LMP

4、1的關(guān)系。旨在為開(kāi)拓As2O3在鼻咽癌應(yīng)用提供參考。方法方法：以穩(wěn)定表達(dá)LMP1的低分化鼻咽癌細(xì)胞株HNE1LMP1與不表達(dá)LMP1的親本細(xì)胞株HNE1為體外研究對(duì)象。第一部分：HNE1LMP1細(xì)胞與含有不同濃度的As2O3培養(yǎng)基(0、1、2、3、4、5μmolL)共同培養(yǎng)48小時(shí)，采用免疫印跡法及激光共聚焦分析LMP1蛋白表達(dá)的變化應(yīng)用RTPCR方法分析LMP1mRNA的含量。然后，兩株細(xì)胞接受不同濃度的砷處理48小時(shí)，MTT法檢測(cè)其

5、半數(shù)抑制濃度，了解其對(duì)砷的不同敏感性；選擇2、4μmolLAs2O3為研究點(diǎn)，采用相差倒置顯微鏡、HE染色法及TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞的形態(tài)變化及凋亡情況；采用Southernblotting檢測(cè)端粒長(zhǎng)度的變化，探討LMP1下調(diào)在細(xì)胞凋亡中所起的作用。第二部分：收集3μmolL方法處理后仍貼壁的細(xì)胞，分析其潛在的轉(zhuǎn)移能力。首先是通過(guò)其克隆形成率了解其潛在增殖能力；然后應(yīng)用人工基底膜的方法評(píng)價(jià)兩株殘留細(xì)胞的粘附、侵襲、穿透能力的變化；West

6、ernblot、免疫組化和RTPCR法分析MMP9的蛋白水平及mRNA含量變化。結(jié)果：結(jié)果：第一部分：第一部分：一定劑量下的砷（2μmolL以上）作用48h影響LMP1表達(dá)，LMP1受抑制程度與砷的濃度相關(guān)，濃度越高，抑制越明顯；LMP1陽(yáng)性的細(xì)胞對(duì)砷的反應(yīng)性較好，As2O3作用下48小時(shí)，HNE1LMP1的半數(shù)抑制濃度是2.22molL，HNE1細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度是5.09molL，2、4μmolL的凋亡指數(shù)分別是23.442.4%和