1、目的:
　　⑴建立可靠的體外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細胞(KFB)的方法,觀察其生物學特征,為瘢痕疙瘩的體外實驗構建平臺。
　　⑵研究鹽酸氨酮戊酸光動力法(ALA-PDT)對KFB增殖的抑制作用,初步探討ALA-PDT對瘢痕疙瘩的作用機理,為臨床預防和治療瘢痕疙瘩提供理論依據。
　?、茄芯緼LA-PDT對KFB凋亡的影響,分析凋亡過程中Caspase3、8、9表達的水平,對凋亡通路進行初步探討。
　　方法:
　　

2、⑴采用組織貼壁法進行體外瘢痕疙瘩的成纖維細胞的培養(yǎng),并進行傳代,觀察其生物學特征,并采用免疫細胞化學法進行成纖維細胞的鑒定。
　?、茖Ⅲw外培養(yǎng)的KFB,分別加入含ALA0.5mmol/l、1.0mmol/l、2.0mmol/l、4.0mmol/l、8.0mmol/l濃度的DMEM培養(yǎng)液,避光培養(yǎng)5h后,用光動力儀照射,能量密度1~64J/cm2,CCK8檢測KFB的活性,計算其增殖水平。
　?、菍Ⅲw外培養(yǎng)的KFB,加入含AL

3、A4.0mmol/l濃度的DMEM,避光培養(yǎng)5h,光動力治療儀照射,能量密度32J/cm2,測試其Caspase3、8、9的表達水的變化。
　　結果:
　　⑴組織貼壁法培養(yǎng)成纖維細胞,接種后5天可以見到組織邊緣有細胞萌出,培養(yǎng)3~4周后可以傳第一代,對第3~5代成纖維細胞進行波形蛋白免疫細胞化學染色,可見瘢痕疙瘩成纖維細胞胞漿內大量棕黃色顆粒,核為藍色,波形蛋白為陽性。
　　⑵照射能量在>8.0J/cm2時,隨著ALA

4、濃度和照射劑量增加,對細胞的抑制作用也增強。
　?、茿LA-PDT能同時增強Caspase-3、8、9的活性,表達水平上升。
　　結論:
　　⑴組織貼壁法培養(yǎng)成纖維細胞,操作簡單,節(jié)約成本且能獲得活性高、純度高的成纖維細胞,可以作為瘢痕疙瘩體外實驗的研究。
　　⑵本實驗表明ALA-PDT對KFB的增殖具有明顯抑制作用,ALA濃度和激光的能量是影響細胞存活率的重要因素。
　?、茿LA-PDT能夠誘導KFB的凋