1、有機磷農(nóng)藥具有一定的胚胎毒性，能夠影響胚胎的發(fā)育。實驗室之前的研究發(fā)現(xiàn)久效磷暴露斑馬魚胚胎能夠影響其生殖腺的發(fā)育，導(dǎo)致卵巢內(nèi)生殖細胞形態(tài)和排列的異常。為進一步探究久效磷對斑馬魚胚胎發(fā)育的毒性效應(yīng)，本文統(tǒng)計分析了久效磷對斑馬魚胚胎存活率、孵化率、心跳、畸形情況（心包囊腫和骨骼彎曲）、運動行為（自發(fā)運動）以及生長水平（頭長和體長）的影響，首先從個體水平上探討了久效磷的胚胎毒性。多種基因參與調(diào)控了斑馬魚胚胎的發(fā)育，久效磷暴露斑馬魚導(dǎo)致的心包囊

2、腫、脊柱彎曲和性腺結(jié)構(gòu)異?？赡苁且驗槠溆绊懥税l(fā)育相關(guān)基因的表達，而外源物質(zhì)能夠通過改變基因啟動子區(qū)的甲基化水平來影響基因的表達。因此，本文進一步研究了久效磷暴露斑馬魚胚胎對心臟發(fā)育基因(Tbx2)、肌肉發(fā)育基因(Mef2c)和性腺發(fā)育基因(Vasa) mRNA表達水平的影響，以及久效磷暴露斑馬魚對Vasa基因啟動子區(qū)甲基化水平的影響，從分子水平探討了久效磷對斑馬魚胚胎發(fā)育毒性的潛在機制。本文研究結(jié)果表明:
　　(1)0.0004、

3、0.004、0.04和0.4mg/L的久效磷暴露斑馬魚胚胎至96hpf(hourpost fertilization)，對胚胎的存活率、死亡率、頭長、體長以及自發(fā)運動均無顯著影響。久效磷暴露顯著降低了36hpf斑馬魚胚胎的心跳，升高了96hpf仔魚心包囊腫和脊柱彎曲的百分比，說明久效磷具有胚胎毒性，主要表現(xiàn)為致畸性，能夠影響斑馬魚心臟和骨骼的發(fā)育。
　　(2)0.0004、0.004、0.04和0.4mg/L的久效磷暴露斑馬魚胚胎

4、至96hpf,采用實時定量PCR(real-time PCR)檢測48和60hpf心臟發(fā)育相關(guān)基因T盒子2(Tbx2)、肌細胞增強因子2C(Mef2c)，以及48、60和96hpf性腺發(fā)育相關(guān)基因Vasa(DEAD-family protein ofATP-dependent RNA helicase) mRNA的表達水平。研究結(jié)果表明，久效磷暴露降低了48hpf胚胎Tbx2基因的表達水平，而對60hpf胚胎Tbx2基因表達水平無影響;

5、暴露升高了48hpf胚胎Mef2c基因的表達水平，但是，對60hpf胚胎Mef2c基因表達水平無影響，說明久效磷可能是通過影響Tbx2和Mef2c基因在心臟發(fā)育關(guān)鍵期內(nèi)(48hpf內(nèi))的表達水平，進而影響心臟的正常發(fā)育。另外，久效磷暴露對96hpf胚胎Vasa基因表達水平無影響，但降低了48和60hpf胚胎Vasa基因的表達水平，可能會對PGCs的遷移過程產(chǎn)生影響。
　　(3)0.0004、0.004、0.04和0.4mg/L的久

6、效磷暴露斑馬魚胚胎至96hpf，采用亞硫酸氫鹽測序(BSP)方法檢測Vasa基因啟動子區(qū)5個CpG位點的甲基化狀態(tài)，采用實時定量PCR檢測48、60和96hpf DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因(Dnmt1)以及基化CpG連接蛋白2基因(Mecp2) mRNA的表達水平。結(jié)果表明:久效磷暴露斑馬魚胚胎至48、60和96hpf，Vasa基因啟動子區(qū)的甲基化水平均無顯著差異，說明久效磷可能不是通過影響Vasa基因啟動子區(qū)的甲基化水平來影響其基因表達的。

7、另外，久效磷暴露對Dnmt1基因的表達無影響，卻升高了Mecp2基因的表達水平，說明組蛋白的去乙?；图谆赡苁蔷眯Я子绊慥asa基因表達的潛在機制。
　　綜上，本研究表明，久效磷具有胚胎毒性，在個體水平上，能夠影響心臟和骨骼的發(fā)育，導(dǎo)致心包囊腫和骨骼彎曲;在分子水平上，久效磷能夠通過影響心臟發(fā)育相關(guān)基因Tbx2、肌肉發(fā)育基因Mef2c以及性腺發(fā)育相關(guān)基因Vasa的表達水平，進而影響心臟和性腺發(fā)育;并且進一步研究發(fā)現(xiàn)，DNA甲基