1、近年來(lái)，新型污染物氨基脲(semicarbazide，SEM)主要存在于嬰兒食品、果汁、果醬、蜜餞等日常食品中，而在液體牛奶、面粉等食品中也檢出氨基脲殘留。2009年9月我國(guó)東營(yíng)潮河入?？诩班徑Ｓ蚝Ｋ陌被搴扛哌_(dá)46.41μg/L，貝類(lèi)等生物體內(nèi)氨基脲平均含量為3.14～6.46μg/kg，超過(guò)歐盟對(duì)動(dòng)物源性食品中氨基脲殘留的限量值1.0μg/kg。由此可見(jiàn)，氨基脲不但威脅人類(lèi)的食品安全，也對(duì)我國(guó)海洋生態(tài)環(huán)境造成了嚴(yán)重危害。已有的

2、研究發(fā)現(xiàn)，氨基脲在哺乳動(dòng)物和魚(yú)體內(nèi)發(fā)揮潛在的抗雌激素效應(yīng)，例如降低雌性大鼠血漿E2水平，抑制雌性斑馬魚(yú)肝臟中雌激素受體(estrogen receptorα，ERα)基因和卵黃原蛋白1(vitellogenin-1，vtg-1)基因的表達(dá)，但是氨基脲發(fā)揮以上抗雌激素效應(yīng)的機(jī)制尚不明確。因此，本文采用氨基脲暴露性成熟的成年斑馬魚(yú)，以斑馬魚(yú)性腺組織性激素含量為指標(biāo)，明確氨基脲在成年斑馬魚(yú)體內(nèi)是否通過(guò)拮抗17β-雌二醇(17β-estradi

3、ol，E2)水平發(fā)揮抗雌激素效應(yīng);其次在類(lèi)固醇合成酶的基因表達(dá)水平以及下丘腦-垂體-性腺軸(hypothalamus-pituitary-gonad axis，HPG軸)對(duì)E2的調(diào)控兩方面從E2合成的角度探究氨基脲對(duì)斑馬魚(yú)的抗雌激素效應(yīng)機(jī)制。
　　本研究結(jié)果表明:
　　(1)1μg/L、10μg/L、100g/L、1000μg/L氨基脲暴露成年雌性斑馬魚(yú)96h/28d，采用同位素放射免疫分析法(radioimmunoassa

4、y，RIA)檢測(cè)斑馬魚(yú)性腺中性激素含量，結(jié)果表明:96h的暴露實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，卵巢E2水平在10μg/L濃度組出現(xiàn)極顯著降低;28d的暴露結(jié)果顯示，雌魚(yú)卵巢E2水平在1μg/L氨基脲濃度組顯著降低。另外，本實(shí)驗(yàn)室另一位博士生的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L氨基脲暴露成年雌性斑馬魚(yú)96h/28d能夠抑制血漿中E2水平。因此我們認(rèn)為氨基脲主要是通過(guò)抑制雌性斑馬魚(yú)卵巢內(nèi)E2的合成，拮抗E2水平，發(fā)揮抗雌激素效

5、應(yīng)。
　　(2)1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L氨基脲暴露成年雌性斑馬魚(yú)96h/28d，采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)類(lèi)固醇合成關(guān)鍵酶P450scc、P450c17、3β-HSD、P450aromA的基因表達(dá)量變化，結(jié)果表明:96h的暴露結(jié)果表明，1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L氨基脲暴露對(duì)卵巢3β-HSD1、P450c17、P450scc的表達(dá)均未產(chǎn)生顯著影響，P450aromAmRN

6、A表達(dá)水平在1、10、100μg/L濃度組顯著降低;28d的暴露結(jié)果顯示，卵巢P450aromA、P450c17、P450sccmRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比在不同濃度組均表現(xiàn)出不同程度降低，而3β-HSD1基因表達(dá)量無(wú)顯著變化。因此，我們認(rèn)為氨基脲能夠下調(diào)雌魚(yú)卵巢細(xì)胞色素氧化酶的表達(dá)(主要是作用于限速酶P450aromA)，抑制卵巢E2的合成。此外，E2與1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L氨基脲聯(lián)合暴露成年雄性斑

7、馬魚(yú)96h/28d的結(jié)果表明:96h的聯(lián)合暴露實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氨基脲與E2聯(lián)合暴露相比E2單獨(dú)處理組主要在不同濃度降低類(lèi)固醇合成酶基因P450aromA、P450sccmRNA表達(dá)水平。氨基脲與E2聯(lián)合暴露雄性斑馬魚(yú)28d的結(jié)果顯示，與E2單獨(dú)處理組相比，E2與氨基脲的聯(lián)合暴露能夠在不同濃度下降低P450aromA、P450c17、P450sccmRNA表達(dá)水平。聯(lián)合暴露的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氨基脲主要是通過(guò)拮抗外源添加E2在成年雄性斑馬魚(yú)體內(nèi)

8、引起的芳香化酶表達(dá)量的上調(diào)，進(jìn)而發(fā)揮抗雌激素效應(yīng)。
　　(3)1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L氨基脲暴露成年雌性斑馬魚(yú)96h/28d，采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)HPG軸上調(diào)控E2合成的相關(guān)因子FSHβ、LHβ、sGnRH、P450aromB基因表達(dá)量，結(jié)果表明:96h/28d的結(jié)果顯示，1μg/L、10μg/L氨基脲暴露顯著降低雌性斑馬魚(yú)腦中sGnRH、FSHβ基因表達(dá)量。因此，我們認(rèn)為氨基脲通過(guò)下調(diào)下丘腦s

9、GnRH的表達(dá)降低垂體中FSHβmRNA的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制芳香化酶的活性。此外，E2與1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L的氨基脲聯(lián)合暴露成年雄性斑馬魚(yú)96h/28d的結(jié)果顯示:96h的暴露實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，E2與1μg/L、10μg/L氨基脲聯(lián)合暴露相比E2單獨(dú)處理組顯著降低sGnRHmRNA的表達(dá)水平;28d的結(jié)果顯示，與E2單獨(dú)處理組相比，E2與1μg/L氨基脲聯(lián)合暴露導(dǎo)致雄性斑馬魚(yú)腦中FSHβ、LHβ、sGnRH

10、mRNA的表達(dá)水平較E2單獨(dú)處理組均顯著降低，因此我們認(rèn)為氨基脲主要是通過(guò)拮抗外源添加E2在成年雄性斑馬魚(yú)腦中引起的sGnRH、FSHβ表達(dá)量的上調(diào)，發(fā)揮其抗雌激素效應(yīng)。
　　綜上，通過(guò)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氨基脲發(fā)揮抗雌激素效應(yīng)的機(jī)制是通過(guò)抑制斑馬魚(yú)下丘腦中HPG軸起始因子sGnRH的表達(dá)，進(jìn)一步下調(diào)垂體FSHmRNA的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制卵巢中細(xì)胞色素氧化酶P450家族(主要是P450aromA)基因表達(dá)量，最終抑制卵巢E2的合成