1、豬囊尾蚴病是由豬帶絳蟲的幼蟲(囊尾蚴)引起的一種人畜共患病。我國人體囊尾蚴病分布廣泛，嚴重威脅著廣大人民健康。多年來防治本病主要是以藥物防治為主，但是由于抗藥性的不斷出現(xiàn)及藥物殘留等問題的嚴重性，限制了其在臨床上的應用。進入20世紀80年代后，分子生物學技術的快速發(fā)展促進了抗體研究的進展，基因工程抗體應運而生。其中單鏈抗體是目前應用最為廣泛的重組抗體，在各個領域均有大量研究報道。但在寄生蟲研究中尤其是豬囊尾蚴領域沒有單鏈抗體的報道。本實

2、驗克隆出抗豬囊尾蚴單克隆抗體輕重鏈可變區(qū)基因片段，為抗豬囊尾蚴單鏈抗體的構(gòu)建奠定了基礎。 方法：首先，復蘇分泌抗豬囊尾蚴單克隆抗體雜交瘤細胞，培養(yǎng)至最佳生長狀態(tài)，瓊脂糖擴散試驗檢測分泌抗豬囊尾蚴單克隆抗體雜交瘤細胞的活性。取活性高的雜交瘤細胞，用Trizol一步法提取分泌抗豬囊尾蚴單克隆抗體雜交瘤細胞總RNA。然后，根據(jù)genebank公布的相關序列，合成兩對特異性引物，以提取的總RNA為模板，經(jīng)一步法RT-PCR反應擴增抗體輕

3、重鏈可變區(qū)基因。最后，將擴增抗體輕重鏈可變區(qū)基因與克隆載體pMD18-T連接，瓊脂糖電泳檢測后，轉(zhuǎn)化于感受態(tài)細胞JM109。藍白斑法篩選出陽性重組子進行菌落PCR鑒定。取含有陽性重組子的菌液送至生物公司測序。 結(jié)果：提取分泌抗豬囊尾蚴單克隆抗體的雜交瘤細胞總RNA后，應用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測提取得總RNA。結(jié)果顯示：A260/280值=1.96； RNA瓊脂糖凝膠電泳可以清晰地看到28sRNA，18sRNA的條帶。

4、證明得到了能夠分泌抗豬囊尾蚴特異性單克隆抗體雜交瘤細胞總RNA。以提取的總RNA為模板，一步法RT-PCR反應擴增抗體輕重鏈可變區(qū)基因。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，輕鏈可變區(qū)基因和重鏈可變區(qū)基因長度在400bp左右，符合鼠抗體特征，表明得到了抗豬囊尾蚴單克隆抗體輕重鏈可變區(qū)基因片段。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測回收后連接克隆載體pMD18-T，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞JM109，藍白斑法篩選出陽性重組子，以通用引物對陽性重組子進行鑒定，菌落-PCR檢測證明重組