攜蜂毒素基因腺病毒載體的構建及體外抑瘤實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：將蜂毒素基因置于CMV（cytomegalovirus）啟動子和AFP（α-fetoprotein）轉錄調控序列（rAFP）驅動下,構建重組腺病毒載體,進行體外轉基因抑瘤實驗,并觀察蜂毒素基因轉染對肝癌細胞惡性度的影響.方法：人工合成蜂毒素基因,用Kozak序列優(yōu)化翻譯起始區(qū),并進行人類最適密碼子的轉換,然后置于CMV啟動子或rAFP之后,用細菌內高效同源重組法將目的基因重組入腺病毒質粒中;將腺病毒質粒用PacⅠ酶切線性化后,脂質

2、體介導轉染293細胞進行腺病毒的包裝.攜有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌細胞后,RT-PCR實驗觀察蜂毒素基因是否發(fā)生轉錄;采用MTT法和<'3>H-TdR摻入法測定蜂毒素基因轉染對肝癌細胞增殖的抑制作用;采用ELISA雙抗體夾心法定量檢測甲胎蛋白,流式細胞術檢測CD51表達情況,以觀察蜂毒素基因轉染對肝癌細胞生物學性狀的影響.并以CMV啟動子作為對照,觀察在rAFP驅動下,蜂毒素基因轉染能否特異性地抑制AFP陽性細胞的增殖.結論：蜂毒素基

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