1、目的：觀察ACEI和AT<,1>受體拮抗劑對大鼠肺切除加野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓肺血管重構(gòu)的影響，進而探討AngⅡ在肺動脈高壓肺血管重構(gòu)的機制。 方法： 1．ACEI和AT<,1>受體拮抗劑對大鼠肺高壓肺血管重構(gòu)影響的研究。 1.1 大鼠肺高壓模型的建立：用大鼠左肺切除加皮下注射野百合堿建立肺高壓模型并進行形態(tài)學(xué)觀察：觀察其平均肺動脈壓(mPAP)、新生內(nèi)膜形成以及心室重量即右心室/左心室+室間膈(RV/LV+S)

2、的變化；免疫組化法比較肺血管平滑肌細胞(VSMC)α-平滑肌肌動蛋白(α-actin)表達、增殖細胞核抗原(PCNA)陽性細胞表達、肺小動脈中膜厚度百分比、肺小動脈新生內(nèi)膜增殖度和平均血管阻塞計分(VOS)。 1.2 ACEI和AT<,1>受體拮抗劑對大鼠肺高壓肺血管基質(zhì)重構(gòu)影響：用ACEI(卡托普利captopril)和AT<,1>受體拮抗劑(氯沙坦losartan)分別進行干預(yù)，免疫組化檢測肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)2、

3、9和其組織特異抑制物-1(TIMP-1)；應(yīng)用實時熒光定量PCR(FQ-PCR)檢測MMP-2、9、TIMP-1、α1-Ⅰ型膠原(Collagen Ⅰ-α1)、α1 Ⅳ型膠原(CollagenⅣ-α1)、內(nèi)源性血管彈性蛋白酶(EVE)和韌粘素C(TN-C)mRNA在肺組織中的表達；明膠酶譜法(zymography)檢測MMP-2、9在肺組織中的活性；苦味酸-天狼猩紅染色觀察膠原在肺組織的分布與含量。 1.3 ACEI和AT<,1>受體拮

4、抗劑對大鼠肺組織細胞凋亡影響：TUNEL法比較各組細胞凋亡變化，免疫組化法比較凋亡相關(guān)基因bax、bcl-2變化。 2. AngⅡ?qū)Υ笫蠓蝿用}平滑肌細胞(PASMC)影響及洛沙坦干預(yù)的研究。 2.1 大鼠肺動脈平滑肌細胞培養(yǎng)：采用組織貼塊法進行大鼠PASMC原代培養(yǎng)，用4-6代細胞進行試驗。 2.2 AngⅡ?qū)ASMC MMPs、TIMP-1和膠原mRNA的影響：MTT法確定AngⅡ最佳作用濃度(1x10<'-

5、8>M)，應(yīng)用AngⅡ刺激細胞并用氯沙坦干預(yù)，以不同時間點(1h、3h、12h、24h)分組，應(yīng)用FQ-PCR檢測PASMC中MMP-2、9、TIMP-1、Collagen Ⅰ-α 1、Collagen Ⅳ-α 1 mRNA表達。 2.3 AngⅡ?qū)ASMC增殖與凋亡的影響：分別以不同AngⅡ濃度梯度(1x10<'-9>M、lx10<'-8>M、1x10<'-7>M)和不同作用時間點(8h、12h、24h、48h)分組，均設(shè)空

6、白對照組，應(yīng)用流式細胞術(shù)(FCM)檢測細胞增殖與凋亡。 結(jié)果： 1.左肺切除加野百合堿導(dǎo)致了大鼠嚴重肺高壓形成，并出現(xiàn)新生內(nèi)膜，該組mPAP、右心室重量、小動脈肌化程度、肺小動脈中膜厚度百分比、肺小動脈新生內(nèi)膜增殖度和平均血管阻塞計分較其它各組顯著升高(P<0.05)。 2.肺高壓模型組肺組織MMP-2、9、TIMP-1、EVE、TN-C及Collagen Ⅰ-α 1、Collagen Ⅳ-α1 mRNA表達較其

7、它各組顯著升高(P<0.05)，卡托普利和洛沙坦組上述各指標較模型組均下降(P<0.05)。 3.模型組肺血管細胞凋亡較正常對照組增加(P<0.05)，干預(yù)組細胞凋亡較模型組減少(P(0.05)。 4．AngⅡ誘導(dǎo)PASMC增殖，于12h達高峰；同時誘導(dǎo)肺動脈平滑肌細胞凋亡，于24h達高峰；氯沙坦干預(yù)組細胞增殖減少同時細胞凋亡亦減少。 5．AngⅡ誘導(dǎo)PASMC MMP-2、9、TIMP-1、Collagen Ⅰ

8、-α 1、CollagenⅣ-α 1 mRNA表達；氯沙坦干預(yù)組使上述指標的mRNA表達下降(P<0.05)。 結(jié)論： 1．左肺切除加野百合堿導(dǎo)致了大鼠肺血管重構(gòu)、嚴重肺高壓形成； 2．AngⅡ在肺高壓肺血管重構(gòu)中的機制可能與調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡及細胞外基質(zhì)成分的改變有關(guān)； 3．ACEI和AT<,1>受體拮抗劑可通過干預(yù)ECM重構(gòu)以及影響增殖與凋亡，有效抑制大鼠肺動脈高壓肺血管重構(gòu)，降低肺動脈壓力；