1、該研究應(yīng)用DNA重組技術(shù)構(gòu)建了含有 cylin D1 5<'>端序列反義片段的反義 cylin D1 RNA 表達載體(pCI-neo/RARE3-TK/AScylin D1),并采用免疫組化方法觀測到轉(zhuǎn)染細胞中的反義 cylin D1 表達可受RA調(diào)控;同時運用MTT實驗、NBT實驗、透射電鏡觀測、免疫熒光檢測、RT-PCR以及蛋白免疫印跡等技術(shù)手段,初步探討了 RA 及其誘導(dǎo)的反義 cylin D1 RNA 表達對HL-60 細胞的

2、效應(yīng)及其可能的分子機制.該研究主要結(jié)果如下:1.采用DNA重組技術(shù)成功構(gòu)建了含有cylin D1 5<'>端序列反義片段的真核表達載體(pCI-neo/RARE3-TK/AScylin D1,轉(zhuǎn)染HL-60細胞,經(jīng)G418篩選陽性細胞克隆,利用 RA 處理后,轉(zhuǎn)染組細胞的 cylin D1 表達量明顯低于未轉(zhuǎn)染組.表明RA可誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染細胞內(nèi)的反義 cylin D1 的表達.2.RA處理(pCI-neo/RARE3-TK/AScylin D

3、1)轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的HL-60細胞后,可以抑制細胞增殖、誘導(dǎo)細胞分化的發(fā)生,其中以轉(zhuǎn)染細胞經(jīng)RA處理后變化更為顯著.說明RA可經(jīng)RA依賴的反義 cylcin D1的表達誘發(fā)相關(guān)效應(yīng)的發(fā)生,且兩者具有協(xié)同作用. 3.pCI-neo/RARE3-TK/AScylin D1轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的HL-60細胞經(jīng)RA處理后,細胞中的CDK4與Rb mRNA以及CDK4蛋白表達水平降低,同時p16的蛋白表達增強,且均以pCI-neo/RARE3-TK/AS