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文檔簡介
1、目的:探討二十二碳六烯酸(DHA)對人卵巢癌耐紫杉醇細(xì)胞株A2780/T對紫杉醇耐藥性的影響,并進(jìn)一步研究DHA逆轉(zhuǎn)耐藥的機(jī)制。
方法:1、CCK-8方法檢測不同濃度DHA(0-512μmol/L)對人卵巢癌敏感細(xì)胞株A2780增殖的影響,篩選出最適作用濃度。2、CCK-8方法檢測不同濃度DHA(0-1000μmol/L)對人卵巢癌耐藥細(xì)胞株A2780/T增殖的影響,篩選出最適作用濃度。3、用特定濃度DHA(64μmol/L及
2、296μmol/L)分別處理A2780及A2780/T, CCK-8方法檢測預(yù)處理后人卵巢癌耐藥細(xì)胞株A2780/T及A2780對紫杉醇耐藥性的影響4、用羅丹明試驗檢測不同濃度DHA(0μmol/L,11μmol/L,33μmol/L,100μmol/L,296μmol/L)聯(lián)合紫杉醇(3μmol/L)作用后,A2780/T細(xì)胞對于藥物外排能力的變化。5、利用流式細(xì)胞儀檢測測不同濃度DHA(0μmol/L,11μmol/L,33μmol
3、/L,100μmol/L,296μmol/L)聯(lián)合紫杉醇(3μmol/L)作用后,細(xì)胞周期的分布改變。6、RT-PCR方法檢測DHA作用于A2780/T細(xì)胞后MDR1 mRNA表達(dá)的變化7、Western blot檢測DHA作用于A2780/T細(xì)胞后P-gp、MDR相關(guān)蛋白(MDR1,MRP, BCRP和LRP)及p38MAPK、NF-κB相關(guān)通路蛋白表達(dá)的變化。
結(jié)果:1、CCK-8法檢測結(jié)果顯示當(dāng)DHA濃度低于64μmol
4、/L DHA對于A2780細(xì)胞毒作用可以忽略不計,選取64μmol/L作為接下來A2780的DHA作用濃度。2、CCK-8法檢測結(jié)果顯示當(dāng)DHA濃度低于296μmol/L DHA對于A2780/T細(xì)胞毒作用可以忽略不計,選取296μmol/L作為接下來A2780/T的DHA作用濃度。3、用特定濃度DHA(64μmol/L及296μmol/L)分別處理A2780及A2780/T后,CCK-8結(jié)果顯示A2780/T對于紫杉醇的IC50下降,
5、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05),而A2780對于紫杉醇的IC50未見明顯變化。4.羅丹明實驗顯示DHA預(yù)處理后,羅丹明在A2780/T細(xì)胞內(nèi)的含量增加,且呈劑量依賴性(p<0.05)。5、流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示A2780/T細(xì)胞中處于靜止期(G0/G1)的細(xì)胞百分比增加(p<0.05)。6、RT-PCR方法檢測結(jié)果顯示DHA可以降低A2780/T細(xì)胞MDR1mRNA表達(dá)水平。7、Western blot方法檢測結(jié)果顯示DHA預(yù)處理后,A2
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