1、背景 動(dòng)脈粥樣硬化仍然是威脅人類健康的主要因素之一。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的水平與冠心病的發(fā)生率呈負(fù)相關(guān)，因此，HDL被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)因素，它的一個(gè)主要的心血管保護(hù)功能是在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用和抗氧化作用。普羅布考是一類作用特殊的降脂兼抗氧化藥物，在降低總膽固醇的同時(shí)也明顯降低HDL-C。臨床研究卻發(fā)現(xiàn)，普羅布考雖降低血漿HDL-C,卻能明顯降低冠心病的發(fā)生率。因此，低水平的HDL-C并

2、不一定與冠心病有關(guān)，對(duì)HDL-C與冠心病的關(guān)系需要深入研究。目前對(duì)HDL的代謝情況仍知之甚少，HDL與動(dòng)脈粥樣硬化形成之間的詳細(xì)機(jī)理尚不清楚。B族Ⅰ型清道夫受體(SR-BI)是HDL受體，有研究發(fā)現(xiàn)小鼠的肝臟高度表達(dá)SR-BI時(shí)明顯降低HDL-C水平，促進(jìn)膽固醇從肝臟的排泄。普羅布考是否會(huì)通過影響SR-BI表達(dá)的途徑影響高膽固醇血癥兔肝細(xì)胞對(duì)HDL的代謝目前尚無報(bào)道。 普羅布考除具有降脂作用外，還具有強(qiáng)大的抗氧化作用。目前認(rèn)為H

3、DL的心血管保護(hù)作用除與其膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)作用有關(guān)外，還與HDL的抗氧化作用有關(guān)。大多數(shù)研究認(rèn)為屏氧酶(PONl)是HDL中起關(guān)鍵作用的抗氧化酶，PONl主要由肝臟分泌，在血液中幾乎全部結(jié)合在HDL上。多個(gè)研究顯示PONl的活性低下是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。目前藥物對(duì)PONl影響的研究罕見，有研究顯示普羅布考可提高膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白缺乏患者的血清PONl的活性約30％，提示普羅布考很有可能通過PONl途徑增強(qiáng)HDL的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。

4、 動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，血脂紊亂是最重要的危險(xiǎn)因素，而內(nèi)皮功能的損傷是動(dòng)脈粥樣硬化過程的中間環(huán)節(jié)。血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)是蛋白C凝血途徑的輔助因子，與凝血酶結(jié)合后活化蛋白C，在調(diào)節(jié)凝血／纖溶過程中起重要作用。內(nèi)皮損傷時(shí)TM釋放致血漿可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)明顯升高。已有研究表明普羅布考可改善血管內(nèi)皮功能，但普羅布考對(duì)TM的影響如何目前未見報(bào)道。 目的 檢測(cè)普羅布考對(duì)高膽固醇血癥兔肝細(xì)胞選擇性攝取HDL中膽固

5、醇酯以及肝臟B族I型清道夫受體(SR-BI)表達(dá)的影響，探討其降HDL-C的機(jī)制；檢測(cè)普羅布考的抗氧化作用以及對(duì)血漿屏氧酶-1(PONl)含量及肝細(xì)胞上PONl基因表達(dá)的影響，探討普羅布考抗氧化的機(jī)制；觀察普羅布考在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成、巨噬細(xì)胞沉積及動(dòng)脈血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)表達(dá)以及血漿sTM濃度的影響，闡明其影響HDL-C水平卻抗動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制。 方法 采用高膽固醇飲食8周建立高膽固醇血癥兔模型，用1％普羅布考干預(yù)

6、6周。采集兔血測(cè)定血脂、超氧化物歧化酶(SOD)總活性、丙二醛(MDA)、PONl及sTM含量的變化。采用傳統(tǒng)的兩步灌注消化法分離培養(yǎng)肝細(xì)胞。培養(yǎng)第8天采用同位素雙標(biāo)記HDL的方法測(cè)定肝細(xì)胞對(duì)HDL中膽固醇的選擇性攝取。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)肝細(xì)胞SR-BI、PONl和主動(dòng)脈TM mRNA的表達(dá)，免疫組化法測(cè)定肝臟SR-BI和主動(dòng)脈巨噬細(xì)胞的分布，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清PONl和血漿sTM的濃度。

7、 結(jié)果 1．高膽固醇飲食8周后，血清總膽固醇(TC)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL—C)、三酰甘油(TG)和HDL—C均明顯升高，普羅布考干預(yù)后血脂水平明顯下降；肝細(xì)胞對(duì)HDL中膽固醇酯的選擇性攝取[(249.68±60.13)ng／mg細(xì)胞蛋白]較高膽固醇組[(104.92± 47.91)ng／mg細(xì)胞蛋白，P<0.01]明顯增加；但普羅布考體外干預(yù)對(duì)正常組肝細(xì)胞的選擇性攝取無影響。 2．高膽固醇組SR-BI的蛋

8、白和mRNA表達(dá)均較正常對(duì)照組減少，普羅布考組肝臟SR-BI的陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)和mRNA表達(dá)均較高膽固醇組明顯增加(0.65±0.06 vs 0.48±0.06，P<0.05)。SR-BImRNA表達(dá) 與肝細(xì)胞的選擇性攝取量呈顯著正相關(guān)(r=0.47，P=0.032)。 3．普羅布考干預(yù)后對(duì)SOD總活性無明顯影響，但MDA含量 [(9.2 1±1.31)u g／m1]較高膽固醇組[(12.57±1.43)u g／m1，p <

9、0.01]明顯降低。普羅布考組PONl的含量和肝臟mRNA的表達(dá)[分 別為(0.79±0.09)u g／ml，0.71±0.06]較高膽固醇組[分別為(0.51±0.08)u g／ml，0.46±0.05，均P<0.01]明顯升高。血 漿PONl的含量與MDA的含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.86，P=0.003)。 4．普羅布考組主動(dòng)脈斑塊面積及內(nèi)膜厚度[分別為(54.6±9.8)％，(30.18±11.52)μm]較高膽固醇組[

10、分別為(82.5±10.5)％，(76.57±13.18)μm，均P<0.01]明顯減少。 5．正常飲食組兔的sTM水平很低[(0.51±0.22)ng／ml]，普羅布考組sTM水平[(3.25±0.52)ng／ml]較高膽固醇組[(7.56± 0.62)ng／m1，P

11、血漿LDL-C、MDA、sTM以及主動(dòng)脈巨噬細(xì)胞陽性數(shù)均呈顯著的正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.82，0.71，0.65和0.53，均為p<0.05。結(jié)論1．普羅布考具有明顯的降脂作用，其降低HDL-C可能與上調(diào)肝臟SR-BI的表達(dá)，促進(jìn)肝細(xì)胞對(duì)HDL中膽固醇的選擇性攝取有關(guān)。 2．普羅布考有明顯的抗氧化作用，可上調(diào)肝臟HDL抗氧化酶PONl的表達(dá)，提高HDL抗氧化作用。這可能是其雖影響HDL-C水平卻具有明顯的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的機(jī)