1、粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocytecolony-stimulatingfactor，G-CSF)是一種分泌性多肽，具有174個(gè)氨基酸，分子量大約是18kD。它最初是從癌細(xì)胞中分離得到，它的基因通過(guò)基因工程技術(shù)已經(jīng)在不同宿主細(xì)胞中被克隆、測(cè)序、表達(dá)。G-CSF能刺激骨髓干細(xì)胞分化、增殖，形成粒細(xì)胞。G-CSF能啟動(dòng)機(jī)體保護(hù)機(jī)制抗感染，主要是通過(guò)提高多形核中性白細(xì)胞和它們的分化成熟形細(xì)胞數(shù)量。G-CSF能激活人體的預(yù)防功能，在不同的

2、病態(tài)環(huán)境下如中性粒細(xì)胞異常偏低或免疫系統(tǒng)低下。例如，在癌癥化療后，移植特別是骨髓移植或者在白細(xì)胞減少情況下6-CSF都可起到作用。但是，G-CSF存在給藥后會(huì)被快速降解，半衰期短的缺陷。G-CSF的這種性質(zhì)對(duì)于提高其生物效能是一個(gè)障礙。 為了延長(zhǎng)G-CSF在體內(nèi)作用的半衰期，本研究設(shè)計(jì)了一種G.CSF與人血清白蛋白(human-serumalbumin，HSA)的融合蛋白。HSA是由585個(gè)氨基酸組成的單鏈無(wú)糖基化的蛋白質(zhì)，分子

3、質(zhì)量為66.5kD。作為血漿的重要成分之一，HSA是許多內(nèi)源因子和外澡藥物的載體，正常情況下不易透過(guò)腎小球。在血漿中的半衰期長(zhǎng)達(dá)2周，體內(nèi)分布極廣而且沒(méi)有酶學(xué)和免疫學(xué)活性，因而是一種理想的生物活性蛋白載體。通過(guò)基因工程技術(shù)將HSA基因與G.CSF基因相連接，使G.CSF在不喪失生物活性的情況下，在血漿中的半衰期能夠得到顯著地延長(zhǎng)。從而，HSA—G-CSF融合蛋白就可降低給藥頻率和劑量，卻能發(fā)揮出與G.CSF相似的藥效作用，具有較好的應(yīng)用

4、前景，并為進(jìn)一步研究蛋白類(lèi)藥物的長(zhǎng)效性提供依據(jù)。 經(jīng)過(guò)westernblotting、等電聚焦、氨基酸測(cè)序、質(zhì)譜分析及圓二色譜分析等方法證實(shí)畢赤酵母表達(dá)的HSA—G.CSF融合蛋白具有正確的HSA和G-CSF結(jié)構(gòu)；NFS-60細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)證明HSA.G-CSF融合蛋白具有與G.CSF相同的生物學(xué)活性；小鼠的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示HSA.G.CSF融合蛋白延長(zhǎng)了G.CSF在體內(nèi)作用的半衰期，降低了清除率，從而證實(shí)HSA.G.CSF融合