1、白細胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)是分子量為15kDa的糖蛋白，在體內(nèi)由T細胞產(chǎn)生，通過促進T細胞的增值，增強人體的免疫能力。為提高IL-2在體內(nèi)的半衰期，實驗室構(gòu)建了攜帶有IL2-HSA融合蛋白編碼基因的質(zhì)粒pPIH，并在PichiapastorisKM71中表達。本研究在此基礎上，通過三種溶氧控制策略和甲醇誘導條件的改變，試圖在5L罐中，探索提高產(chǎn)物表達量的最優(yōu)條件，結(jié)果證明已構(gòu)建的P.pastorisKM71/

2、pPIH，產(chǎn)物的最大表達量為44mg/L，該菌株生產(chǎn)潛力小。 構(gòu)建了3株不同宿主的IL2-HSA表達菌，P.pastorisGS115/pPIH、P.pastorisKM71/pPIH、P.pastorisSMD1168/pPIH。對其誘導條件優(yōu)化后，在各自的最優(yōu)表達條件下進行比較發(fā)現(xiàn)，GS115最適合表達IL2-HSA融合蛋白，其搖瓶表達量為314mg/L，分別是KM71，SMD1168表達量的2.7倍和2.9倍。對三株菌的發(fā)

3、酵上清進行WesternBlot驗證，結(jié)果顯示，81kDa處的條帶可以與HSA和IL2兩種抗體都發(fā)生免疫反應，且分子量與理論計算相符，認為是完整的IL2-HSA蛋白。發(fā)酵清液經(jīng)脫鹽、凍干保存，取干粉復溶后，用CTLL-2/MTT法測得粗蛋白的IL-2生物學活性為1.05×106IU/mg。 最后根據(jù)密碼子的偏愛性以及IL-2的結(jié)構(gòu)特性，本研究對天然IL2編碼序列進行了優(yōu)化，用高頻密碼子替換其中低頻密碼子，并將第125位游離Cys