1、目的：
　　 觀察DC、CIK共培養(yǎng)細胞（DC-CIK）聯(lián)合索拉菲尼對肝癌細胞的體內(nèi)外殺傷效應(yīng)。探討生物治療與分子靶向治療聯(lián)合的新模式，為肝癌的綜合治療提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 一、DC、CIK細胞的體外誘導(dǎo)擴增及表型檢測。
　　 分離健康供體外周血單個核細胞，加入不同細胞因子體外誘導(dǎo)擴增培養(yǎng)DC、CIK細胞。于第8 d天收集DC、CIK細胞，以1:5的比例混合培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)7d后進行靶細胞殺傷

2、實驗。流式細胞儀檢測DC表面成熟標(biāo)志CD83、CD80、CD86、HLA-DR的表達，CIK細胞檢測CD3、CD4、CD8、CD56的表達。
　　 二、DC-CIK共培養(yǎng)細胞及索拉菲尼對肝癌細胞的體外殺傷活性及凋亡率檢測。
　　 應(yīng)用CCK-8法檢測索拉菲尼單藥組，DC-CIK組及DC-CIK聯(lián)合索拉菲尼治療組（聯(lián)合組）對肝癌細胞系BEL-7402的殺瘤活性。Annexin v-FITC細胞凋亡檢測試劑盒檢測以上各組對肝

3、癌細胞凋亡率的影響；凋亡細胞形態(tài)學(xué)鑒定使用Hoechst 33258染料對固定后的細胞染色檢測。
　　 三、比較各組對裸鼠肝癌移植瘤生長的抑制作用。
　　 用肝癌細胞BEL-7402建立裸鼠皮下移植瘤模型，將20只裸鼠隨機分為生理鹽水對照組、索拉菲尼單藥組、DC-CIK治療組、聯(lián)合組，每3天測量瘤體大小，比較各組對裸鼠肝癌移植瘤生長的抑制作用。
　　 結(jié)果：
　　 一、DC、CIK的體外培養(yǎng)及表面抗原檢測

4、
　　 外周血單個核細胞經(jīng)GM-CSF、IL-4誘導(dǎo)可獲得成熟DC，加入腫瘤裂解物抗原及誘導(dǎo)因子后，DC表面成熟標(biāo)志CD83、CD80、CD86、HLA-DR的表達明顯增加。CIK細胞中CD3+CD56+細胞為主要效應(yīng)細胞，經(jīng)多種細胞因子共同培養(yǎng)14天后CIK細胞成熟，CD3+CD56+細胞比例明顯增多，絕對數(shù)量上擴增了近1000倍。
　　 二、DC-CIK聯(lián)合索拉菲尼誘導(dǎo)的特異性殺傷作用及調(diào)亡率
　　 體外實驗

5、結(jié)果表明，聯(lián)合組對肝癌細胞的殺傷率及誘導(dǎo)凋亡率明顯高于各單獨治療組，聯(lián)合組殺傷率最高達（75.24±1.91）％，是DC-CIK組的1.8倍，是索拉菲尼單藥組的2.1倍（P<0.01），聯(lián)合組誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡率達（78.78±2.54）％，與單獨治療組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 三、DC-CIK聯(lián)合索拉菲尼對裸鼠肝癌移植瘤的影響
　　 體內(nèi)實驗表明，DC-CIK細胞聯(lián)合索拉菲尼可明顯抑制裸鼠肝癌細胞種植