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文檔簡介
1、流產(chǎn)嗜衣原體感染是能引起羊、牛、豬等多種動物流產(chǎn),產(chǎn)下死胎或弱胎的主要原因。作為人獸共患病病原,懷孕婦女與帶病動物接觸后會導(dǎo)致流產(chǎn)現(xiàn)象的發(fā)生。危及公共衛(wèi)生安全及造成照成畜牧業(yè)經(jīng)濟的重大損失。流產(chǎn)嗜衣原體傳統(tǒng)檢測方法包括:分子生物學(xué)檢測法、直接涂片染色法、補體結(jié)合實驗,酶聯(lián)免疫吸附實驗等。但是傳統(tǒng)方法這些方法存在各種缺陷:感染風險、靈敏度不夠高、操作步驟繁瑣、檢測時間長等。
AlphaLISA是基于近距離能量共振的原理發(fā)展起來的
2、一種新型的檢測技術(shù),通過抗原抗體的相互作用形成供體磁珠-抗原-抗體-受體磁珠復(fù)合物,在680nm的激光作用下發(fā)生熒光共振能力轉(zhuǎn)移(FRET),釋放單體氧分子作用于受體微珠,于615nm處出現(xiàn)發(fā)射光波。與傳統(tǒng)ELISA方法相比,AlphaLISA技術(shù)具有以下優(yōu)勢:操作簡便、全程無需洗板、精確度高、靈敏度高、樣本需求量小、高通量等。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展,AlphaLISA技術(shù)在病毒性疾病的快速檢測等方面,具有巨大應(yīng)用前景,有進一步取代傳統(tǒng)EL
3、ISA方法的趨勢。
本研究通過對流產(chǎn)嗜衣原體流行病學(xué)的研究,利用基因工程方法,重組表達了流產(chǎn)嗜衣原體外膜主蛋白(MOMP);利用提純的流產(chǎn)嗜衣原體細胞培養(yǎng)上清,免疫BALB/C小鼠,制備單克隆抗體;利用重組表達的流產(chǎn)嗜衣原體外膜主蛋白、樣品血清中的抗體及單克隆抗體之間的相互作用,建立了競爭性AlphaLISA檢測方法。
研究結(jié)果:對流產(chǎn)嗜衣原體MOMP成功的進行了原核表達,經(jīng)Western blot驗證后,重組表達的
4、MOMP蛋白能與制備的針對MOMP蛋白的單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng);通過細胞融合,制備了抗流產(chǎn)嗜衣原體的單克隆抗體;根據(jù)競爭法檢測原理,建立了流產(chǎn)嗜衣原體AlphaLISA檢測方法。根據(jù)流行病學(xué)診斷實驗的評價標準,以商業(yè)化試劑盒檢測作為標準,計算所建立的AlphaLISA檢測方法的靈敏度、特異性、正確指數(shù)、陽性似然比,陰性似然比,綜合積分指數(shù)等,以此來評價所建立的流產(chǎn)嗜衣原體AlphaLISA檢測方法。結(jié)果表明:該方法靈敏度為0.375u
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