1、1,生殖道沙眼衣原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷,朱參勝陜西省地方病防治研究所陜西省皮膚性病防治所,陜西西安,CT感染的發(fā)病機(jī)理、基因型別以及臨床表現(xiàn)CT細(xì)胞內(nèi)寄生，細(xì)胞內(nèi)的網(wǎng)狀體復(fù)制形態(tài)，細(xì)胞外的原體有感染性原體內(nèi)化后定位于包涵體內(nèi)，防止被溶酶體融合免疫反應(yīng)相關(guān)的炎性反應(yīng)通常不十分明顯，多數(shù)表現(xiàn)為隱性感染CT誘導(dǎo)多種防御機(jī)制的修改和破壞，引起CT持續(xù)感染基因型A-C是眼部感染基因型D-K引起泌尿生殖道、直腸、咽喉和眼結(jié)膜感染，圍

2、產(chǎn)期孕婦感染CT可引起新生兒結(jié)膜炎、咽喉炎和肺炎多數(shù)直腸、咽喉感染，以及下生殖道感染均不表現(xiàn)出臨床癥狀,女性CT感染下生殖道后，通過上行至上生殖道，可誘導(dǎo)慢性感染，導(dǎo)致盆腔炎，引起宮外孕和輸卵管因素不孕不育癥許多國(guó)家采取篩查措施，通過定期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)無癥狀的感染者，并治療感染者和性伴基因型A-K感染通常局限于黏膜上皮而基因型L1、L2和L3則穿過上皮，通過淋巴擴(kuò)散，引起侵襲性感染，稱為性病淋巴肉芽腫（LGV)LGV存在于非洲、亞洲

3、、南美和加勒比海部分地區(qū)的地方性疾病男男人群中，已經(jīng)發(fā)生了數(shù)起基因型L2的爆發(fā),生殖道沙眼衣原體感染特點(diǎn),5,,高流行無癥狀感染嚴(yán)重并發(fā)癥依賴實(shí)驗(yàn)室診斷,病原體檢測(cè): 鏡檢, 培養(yǎng)抗原檢測(cè): 快速, EIA核酸檢測(cè): PCR,,,生殖道沙眼衣原體感染特點(diǎn),6,感染后：約70％女性和50％男性為無癥狀86％的女性和55％的男性感染者持續(xù)感染時(shí)間為1年以上。 不尋求治療…….,7,生殖道沙眼衣原體感染特點(diǎn)近年

4、來研究： 引起活動(dòng)性關(guān)節(jié)炎，與動(dòng)脈硬化、冠心病有關(guān) 與HIV感染的促進(jìn)作用 沙眼衣原體感染已成為全世界范圍的公共衛(wèi)生問題!,生殖道沙眼衣原體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法,8,1.免疫學(xué)方法（抗原檢測(cè)） ELISA 免疫熒光法（IFA） 膠體金法2.細(xì)胞培養(yǎng)法,3.核酸檢測(cè)： PCR (Roche), LCR ( Abbott), SDA (ProbeTec BD), TMA (Aptima Gene P

5、robe) 熒光-PCR,標(biāo)本的采集（同淋球菌培養(yǎng)標(biāo)本的采集）,9,男性患者尿道 用男用取材拭子插入尿道 2～3cm，稍用力轉(zhuǎn)動(dòng)，保留數(shù)秒鐘再取出， 以采集到粘膜上皮細(xì)胞。女性患者尿道 用同男性相似的上述方法取材。,標(biāo)本的采集（同淋球菌培養(yǎng)標(biāo)本的采集）,10,宮頸 仔細(xì)檢查陰道壁和宮頸，如果宮頸口外面的分泌物較多，先用無菌棉拭清除過多的宮頸粘液。將一取樣拭子插入宮頸管內(nèi)1～2cm，稍用力轉(zhuǎn)動(dòng)，保留10～30秒后取

6、出。直腸 將取樣拭子插入肛門2～3cm，從緊靠肛環(huán)邊的隱窩中取材。避免接觸糞便。,11,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 原理：Ab－Ag－Ab-酶 －底物－顯色方法：加入標(biāo)本（孵育后洗板） 酶標(biāo)抗體（孵育后洗板） 底 物（孵育） 終止液－判讀結(jié)果。,12,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）結(jié)果判讀cutoff＝陰性對(duì)照＋？陽(yáng)性：OD > t

7、he cutoff value 灰區(qū)（Gray Zone）: 略低于 the cutoff陰性：低于灰區(qū),13,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）結(jié)果判讀陽(yáng)性結(jié)果的確證2002年美國(guó) CDC推薦：所有非培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)用另一種方法確證為真正陽(yáng)性。EIA 陽(yáng)性：可進(jìn)一步將樣本進(jìn)行DFA、“blocking” assay 或基因診斷確證。,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,評(píng) 價(jià)敏感性和特異性與直接免疫熒光法相似 敏感

8、性：79－97％ 高 特異性: 97－99％ 高 試驗(yàn)結(jié)果陰性時(shí)，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數(shù)量不足或標(biāo)本采集不當(dāng)?shù)木壒?14,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,優(yōu) 點(diǎn)快速、方便自動(dòng)化程度高，可同時(shí)檢測(cè)大批量標(biāo)本結(jié)果判斷客觀性強(qiáng)缺 點(diǎn)在低感染率的人群中敏感性差與其它微生物可有交叉反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,15,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,16,臨床應(yīng)用 適宜用于檢測(cè)沙眼衣原體高流行率

9、的人群 臨床和健康體檢 沙眼衣原體感染的篩查,抗原快速檢測(cè),1.原理： 2.方法：拭子＋I(xiàn)液－80℃10分－冷5分－滴加5滴－15分讀結(jié)果,17,抗原快速檢測(cè),結(jié)果判斷陽(yáng)性標(biāo)本在結(jié)果窗見一條細(xì)線。另外，無論標(biāo)本為陽(yáng)性或陰性，都應(yīng)在質(zhì)控窗顯示一條細(xì)線，表明試劑質(zhì)量合格，試驗(yàn)步驟正確,18,抗原快速檢測(cè),19,優(yōu) 點(diǎn)簡(jiǎn)易，方便，快速，尤其適用于基層單位缺 點(diǎn)標(biāo)本中需

10、要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結(jié)果,20,結(jié)論：女性尿道拭子：敏感性32.8%, 特異性99.2% 女性宮頸拭子：敏感性49.7%,特異性97.9% 結(jié)果顯示特異性較好，而較低的敏感性，提示有較高的漏檢率。,21,沙眼衣原體快速檢測(cè)試劑的現(xiàn)場(chǎng)評(píng)估,敏感性50%49.7%32.8%,特異性93.5%97.8%99.2%,試劑1,試劑2,標(biāo)本男性尿道拭子宮頸拭子陰道拭子,沙眼衣原體

11、快速檢測(cè)方法的評(píng)價(jià),核酸擴(kuò)增技術(shù),22,核酸擴(kuò)增法:測(cè)定CT最敏感,首選，金標(biāo)準(zhǔn)國(guó)外抗原檢測(cè)法 (EIA、DFA和 RDT):不再推薦實(shí)時(shí)熒光PCR+自動(dòng)化的核酸提取儀瑞典的變異CT株E/SW2，目標(biāo)序列在發(fā)生缺失突變感染2種以上的CT株時(shí)，可能發(fā)生基因重組雙目標(biāo)檢測(cè)是NAAT改進(jìn)的重要標(biāo)志美國(guó)CDC已經(jīng)不再推薦對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)但當(dāng)用于性虐待的評(píng)估時(shí)，陽(yáng)性結(jié)果必須用檢測(cè)另一個(gè)目標(biāo)區(qū)域的第二種NAAT試驗(yàn)確認(rèn),CT實(shí)驗(yàn)室檢