1、目的:
　　 可溶性人類白細(xì)胞G抗原(Soluble Human Leukocyte Antigen G, sHLA-G)、免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子2/4(Immunoglobulin-like transcript receptor2/4，ILT2/4)及白細(xì)胞介素10(Interleukin10，IL10)是重要的免疫抑制性分子，能夠控制免疫細(xì)胞激活及各種自身反應(yīng)的應(yīng)答。本研究檢測類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthri

2、tis，RA)病人外周血血漿中免疫抑制性分子sHLA-G、IL10的水平及ILT2/4在各類免疫細(xì)胞上表達(dá)的變化，不僅探討三者之間的相關(guān)性、還將探討三者與RA患者DAS28得分(Disease Activity Score28)、病程、臨床用藥的相關(guān)性，為進(jìn)一步揭示RA發(fā)生發(fā)展的機(jī)制提供線索、以及探討其臨床應(yīng)用的潛在價值。
　　 方法:
　　 1.依據(jù)1987年美國風(fēng)濕病協(xié)會對RA的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇46例RA患者及41例年

3、齡和性別相匹配的健康對照。采集血液后收集其臨床及實驗室資料，如年齡，性別，病程，臨床用藥，關(guān)節(jié)腫痛數(shù)量，及血清類風(fēng)濕因子(RheumatoidFactor, RF)、血沉(Erythrocyte Sedimentation Rate，ESR)、C反應(yīng)蛋白(C-Reactive Protein，CRP)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(Anti-Cyclic Citrullinated Peptideantibody, anti-CCP)和抗核抗體(A

4、nti-Nuclear Antibody, ANA)等數(shù)據(jù)結(jié)果。
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測新鮮外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)表面ILT2/4表達(dá)的百分率及熒光強(qiáng)度(mean relative fluorescenceintensity, MRFI)。研究其與疾病活動度DAS28得分、病程、臨床用藥以及實驗室參數(shù)等的關(guān)聯(lián)性。
　　 3.收集剩余全血離心后

5、的血漿，酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked ImmunosorbentAssay，ELISA)檢測血漿中的sHLA-G及IL10的表達(dá)水平。研究它們與各類PBMCs表面ILT2/4表達(dá)的關(guān)聯(lián)性、研究它們與疾病活動度DAS28得分、病程、臨床用藥以及實驗室參數(shù)等的關(guān)聯(lián)性。
　　 4.統(tǒng)計分析:計量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的資料用(x)±S表示，組間比較采用t檢驗;非正態(tài)分布的計量資料用中位數(shù)(M)和四分位數(shù)間距(Q

6、25-Q75)表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗;計量資料間的相關(guān)性檢驗采用Spearman秩相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)均為α=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1.RA患者CD3+T細(xì)胞上表達(dá)的ILT2平均相對熒光強(qiáng)度顯著高于健康對照組(P＜0.05)，且CD3+T細(xì)胞上表達(dá)的ILT2平均相對熒光強(qiáng)度與DAS28得分顯著相關(guān)，尤其表現(xiàn)為RA高/中疾病活動度組CD3+T細(xì)胞上表達(dá)的ILT2平均相對熒光強(qiáng)度顯著高于低

7、疾病活動度組(P＜0.05);但并未發(fā)現(xiàn)與RA病程、臨床用藥及實驗室參數(shù)存在顯著相關(guān)(均P＞0.05)。
　　 2.RA患者CD56+NK細(xì)胞中ILT2陽性表達(dá)細(xì)胞的百分比顯著高于健康對照組(P＜0.05);且RA高/中疾病活動度組CD56+NK中ILT2陽性表達(dá)細(xì)胞的百分比顯著高于低疾病活動度組CD56+NK中ILT2陽性表達(dá)細(xì)胞的百分比(P＜0.05);但并未發(fā)現(xiàn)CD56+NK中ILT2陽性表達(dá)細(xì)胞的百分比與RA病程、臨床用

8、藥及實驗室參數(shù)存在顯著相關(guān)(均P＞0.05)。
　　 3.CD14+單核細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞表面表達(dá)ILT2/4的百分比、熒光強(qiáng)度與健康對照組無顯著性差異(均P＞0.05)，并未發(fā)現(xiàn)與RA疾病活動度DAS28得分、病程、臨床用藥及實驗室參數(shù)存在顯著相關(guān)(均P＞0.05)。
　　 4.RA患者與健康對照組血漿中sHLA-G分子表達(dá)水平無顯著性差異(中位數(shù):59 U/ml vs53 U/ml，P＞0.05)，并未發(fā)現(xiàn)sHL

9、A-G表達(dá)與RA疾病活動度DAS28得分、病程、臨床用藥及實驗室參數(shù)存在顯著相關(guān)(均P＞0.05)。雖然sHLA-G表達(dá)與抑制性受體ILT2/4在T、B、NK淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞上的表達(dá)均不相關(guān)，但是血漿中sHLA-G與IL10的表達(dá)水平之間弱相關(guān)(P＜0.05)。
　　 5.RA患者血漿中IL10分子表達(dá)水平顯著高于健康對照組(中位數(shù):90 ng/mL vs5 ng/mL，P＜0.05)，但并未發(fā)現(xiàn)IL10表達(dá)與RA疾病活動度D

10、AS28得分、病程、臨床用藥及實驗室參數(shù)間存在顯著相關(guān)(均P＞0.05)。本實驗發(fā)現(xiàn)，不僅血漿中IL10與sHLA-G的表達(dá)水平之間存在弱相關(guān)，而且IL10也與CD3+T細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞、CD56+NK細(xì)胞上表達(dá)的抑制性受體ILT2存在弱相關(guān)(均P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血免疫細(xì)胞表達(dá)ILT2的百分比及熒光強(qiáng)度均異常升高，CD3+T細(xì)胞上表達(dá)的ILT2平均相對熒光強(qiáng)度、CD56+N