1、目的:
　　1）RNA干擾技術(shù)抑制人肝癌HepG2細(xì)胞系SNAIL的表達(dá)，觀察對(duì)HepG2細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化表型及細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　2)建立慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞系，并觀察LV(慢病毒)-SNAILsiRNA(SNAIL小干擾RNA)載體對(duì)HepG2細(xì)胞系SNAIL表達(dá)的干擾效果，為實(shí)驗(yàn)觀察提供必備條件。
　　方法:構(gòu)建3組干擾SNAIL表達(dá)shRNA質(zhì)粒，并通過轉(zhuǎn)染細(xì)胞從中選取干擾效果最好的片段，構(gòu)建慢病毒

2、載體，獲得LV-SNAILsiRNA載體。將LV-SNAILsiRNA及不針對(duì)任何已知mRNA的LV-nonsence-siRNA轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞系，得到SNAIL表達(dá)受抑制的LV-SNAILsiRNA組細(xì)胞以及SNAIL表達(dá)不受抑制的LV-Control-GFP組細(xì)胞，并同時(shí)與空白HepG2細(xì)胞（Control組）對(duì)照，用MTT技術(shù)檢測(cè)3組細(xì)胞的增殖狀態(tài)和活性。并分別用定量PCR和Western Blot技術(shù)來檢測(cè)SNAIL以及E-

3、cadherin在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1）成功構(gòu)建LV-SNAILsiRNA慢病毒載體，并證明它能有效持續(xù)抑制HepG2細(xì)胞系中SNAIL基因的表達(dá)(P＜0.05 vs.control)。
　　2) Control組及LV-Control-GFP組細(xì)胞:SNAIL表達(dá)較強(qiáng)，而E-cadherin表達(dá)較弱;而與實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞相比，通過LV-SNAILsiRNA對(duì)SNAIL的RNA干擾有效抑制了H

4、epG2細(xì)胞的生長(zhǎng)(P＜0.05 vs.control)，同時(shí)也使E-cadherin mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平上升(P＜0.05 vs.control)。
　　結(jié)論:通過LV-SNAILsiRNA慢病毒載體能夠持續(xù)有效抑制人肝癌HepG2細(xì)胞系中SNAIL的表達(dá)，并能使E-cadherin表達(dá)水平上升，從而抑制HepG2細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。另外，SNAIL的表達(dá)可能通過抑制E-cadherin從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞EMT的發(fā)生，是H