1、該課題取材于中國疫區(qū)HFRS患者,應用ELISPOT實驗,并結(jié)合傳統(tǒng)的T細胞克隆、T細胞增殖和基因轉(zhuǎn)染等技術(shù),自HFRS患者外周血單個核細胞(PBMC)建立HTNV特異性CD8+T淋巴細胞克隆和B淋巴母細胞系(B-LCL),篩選出能夠引起特異性細胞毒殺傷效應的優(yōu)勢T細胞表位,為揭示HFRS免疫應答和免疫防護的分子基礎、闡明HFRS的發(fā)病機理和研制新型疫苗提供重要資料.主要實驗內(nèi)容和結(jié)果如下:1采用Ficoll密度梯度離心法,分離HFRS

2、患者的外周血單個核細胞(PBMC),并用EBV轉(zhuǎn)化HFRS患者PBMC中的B淋巴細胞,建立了B淋巴母細胞系(B-LCL).2用含HTNV S基因的重組痘苗病毒(rVV)轉(zhuǎn)染B-LCL,并用IFA和Western blot(WB)檢測核衣殼蛋白(NP)在B-LCL中的表達.結(jié)果表明,在B-LCL中能有效表達NP.3表達NP的B-LCL在細胞毒實驗中能被T細胞克隆識別.表明rVV轉(zhuǎn)染B-LCL可作為細胞毒T淋巴細胞(CTL)反應的靶細胞.4

3、采用有限稀釋法,自1名HFRS患者(供體4)建立了2株以CD8+T細胞為主的克隆(4-B,4-C).5合成覆蓋HTNV代表株(76-118株)NP C-端(aa 283~429)的重迭系列短肽庫(共計23條重迭9個aa的1 5肽系列短肽).應用ELISPOT技術(shù)和T細胞增殖實驗,觀察了HFRS患者PBMC中的T淋巴細胞對HTNV NP合成肽段的免疫學反應,初步篩檢T細胞表位.結(jié)果表明,No.51肽(aa 301~315),No.60肽(