1、本論文主要包括兩部分內容。第一部分對結核分枝桿菌耐藥表型與基因型的相關性進行了探討，包括了五種一線抗結核藥物（異煙肼，利福平，乙胺丁醇，鏈霉素，吡嗪酰胺）和四種二線抗結核藥物（氧氟沙星，卡那霉素，阿米卡星和卷曲霉素）。第二部分首次提出了一種高分辨熔解結合非標記探針熔解分析進行長片段突變篩查的方法，并將該方法應用于結核分枝桿菌吡嗪酰胺耐藥突變的篩查。
　　 第一部分:漫長的診斷時間嚴重妨礙了結核病防控工作的展開，尤其影響了耐藥結核

2、病人和HIV共感染結核病人化療方案的快速制定和實施。病人耐藥情況的快速檢測有利于降低致死率，阻斷病原傳播過程。目前的常規(guī)藥敏試驗方法耗時，耗力，難以在基層醫(yī)療衛(wèi)生單位普及。分子診斷的方法具有快速，準確，靈敏度高，價格低廉等優(yōu)點，有望解決目前結核分枝桿菌耐藥檢測所面臨的困境。結核分枝桿菌耐藥主要由相關基因突變引起。在本研究中我們通過對比178份臨床菌株的藥敏試驗結果和基因突變情況，研究耐藥表型與基因型的相關性，試圖發(fā)現(xiàn)具有臨床診斷意義的位

3、點。同時我們還對兩種世界衛(wèi)生組織推薦的比例法藥敏試驗進行了比較。相比于L-J培養(yǎng)基，BECTECTM MGITTM960系統(tǒng)可以在更短時間內提供同樣準確、靈敏的結果，但同時需要高額的支出，并伴隨較高污染率的發(fā)生。我們發(fā)現(xiàn)了不同藥物耐藥相關的突變位點，這些位點可以用來做藥物耐藥性的分子標記。我們得出結論:雖然分子診斷的方法在結核分枝桿菌耐藥檢測上為我們提供一種及時，準確，低廉，高效的檢測方式，但還不能取代經(jīng)典的培養(yǎng)法藥敏試驗。
　　

4、 第二部分:DNA分子隨著溫度的升高，雙鏈解旋成為單鏈。這是DNA分子本身的一種性質，主要與分子的長度和GC含量等相關。這些熔解和變性特征可以用于臨床研究，基因檢測和法醫(yī)學。高分辨熔解分析的方法借助雙鏈結合染料對這一過程進行記錄，使用特殊的軟件對不同溫度的熒光數(shù)據(jù)進行分析，通過熔解曲線，衍生曲線和差異曲線對DNA分子的性質進行研究。我們設計了一種針對DNA長片段突變篩查的策略。該策略結合了高分辨熔解分析和非標記探針熔解分析的優(yōu)點。我們