1、目的:調(diào)查結(jié)核患者中結(jié)核分枝桿菌的耐藥性，分析耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的rpoB、gyrA和gyrB基因的突變情況，探討一線藥物利福平、二線藥物氧氟沙星的耐藥產(chǎn)生與rpoB基因、gyrA和gyrB基因突變的關(guān)系，為結(jié)核分枝桿菌(MTB)的耐藥性研究、耐多藥結(jié)核病(MDR-TB)和廣泛耐藥結(jié)核病(XDR-TB)的診斷與治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:①收集湖南省胸科醫(yī)院6535例就診的肺結(jié)核患者的標(biāo)本，進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)及

2、絕對(duì)濃度法藥物敏感性實(shí)驗(yàn)（簡(jiǎn)稱“藥敏實(shí)驗(yàn)”，DST），檢測(cè)培養(yǎng)菌株對(duì)鏈霉素(SM，S)、異煙肼(INH，H)、利福平(RFP，R)、乙胺丁醇(EMB，E)、卡那霉素(KM，K)和氧氟沙星(OFX，O)6種藥物的敏感性，以結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv為對(duì)照，獲得菌株對(duì)6種藥物的耐藥譜。②選取利福平耐藥菌株，用超聲波裂解法提取MTB基因組DNA，對(duì)與利福平耐藥相關(guān)的rpoB基因進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序并比對(duì)其突變情況，分析基因突變和耐藥表型的關(guān)系。

3、③選取氧氟沙星耐藥菌株，采用超聲波裂解法提取MTB基因組DNA，對(duì)與氧氟沙星耐藥相關(guān)的gyrA和gyrB基因進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序，分析該兩個(gè)基因突變與耐藥表型的相關(guān)性。
　　結(jié)果:①結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性1140例，初治患者826例，復(fù)治患者314例;耐藥肺結(jié)核患者443例，其中耐藥初治患者296例，耐藥復(fù)治患者147例，總耐藥率為38.85％(443/1140)，初治患者總耐藥率為35.84％(296/826)，復(fù)治患者總耐藥率為46.

4、81％(147/314)。耐多藥患者270例，耐多藥率為23.68％(270/1140)，其中同時(shí)耐利福平、異煙肼和鏈霉素在耐多藥模式中所占比例最高，達(dá)32.22％(87/270)。而單一耐藥以利福平最高，耐單藥率為28.51％(325/1140)。②本地區(qū)rpoB基因突變以C531T(Ser→Leu)為主，占69.64％(39/56)，其中耐多藥菌株有29株(70.73％)，其次是發(fā)生在RRDR-526位點(diǎn)上的基因突變，占16.07％

5、。③1140株陽(yáng)性標(biāo)本中有140株對(duì)氧氟沙星耐藥，單耐藥率高達(dá)12.28％，是二線藥物中耐藥率最高的一種藥物，而在32株氧氟沙星耐藥的MTB中，所測(cè)的gyr基因突變共有25株，且均為gyrA基因突變，其突變率為78.1％(25/32)。gyrA基因突變株中，以94位點(diǎn)較為常見(jiàn)，占gyrA基因突變的60.0％(15/25)，而在gyrB基因上均未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)。
　　結(jié)論:①某院就診的結(jié)核患者的結(jié)核分枝桿菌總耐藥率和耐多藥率分別為38