1、本研究首先對分離鑒定的牛源結(jié)核分枝桿菌進行藥物敏感性分析；確定對一線抗結(jié)核藥物具有耐藥性的菌株作為實驗菌株；重點探討耐藥菌株產(chǎn)生耐藥性的分子機制。在此基礎(chǔ)上篩選多個中藥單體作用于分離菌株考察其敏感性，并將中藥單體與抗結(jié)核藥物INH、RFP、SM聯(lián)合作用于牛源結(jié)核分枝桿菌，評價中西藥聯(lián)合作用效果，為中西藥聯(lián)合應用抗結(jié)核分枝桿菌研究奠定基礎(chǔ)。
　　 應用Z-N氏染色法及PCR方法對菌株進行鑒定，確定分離得到的臨床菌株為結(jié)核分枝桿菌復

2、合群菌株；采用噬菌體生物擴增法（Phage amplified biologically assay，PhaB）檢測菌株對藥物的敏感性。進一步應用PCR-直接測序法檢測耐藥結(jié)核分枝桿菌相關(guān)蛋白的編碼基因，分析katG、rpoB、rpsL基因突變與耐藥性產(chǎn)生的關(guān)系；利用微孔阿爾瑪蘭分析法（Microplate Alamar Blue Assay，MABA）將中藥單體分別與INH、RFP、SM聯(lián)合作用于牛源結(jié)核分枝桿菌后，測定其聯(lián)合作用的F

3、ICIs值，以此評價聯(lián)合作用效果。分離鑒定得到MTC 44株，陽性率為23.28%（44/189）。PhaB法對44株臨床分離菌株進行耐藥表型檢測，其中14株對INH耐藥，6株對RFP耐藥，9株對SM耐藥，2株為INH、RFP多重耐藥菌株。PCR-DS結(jié)果顯示31株耐藥株中11株katG基因發(fā)生突變， 5株rpoB基因突變，7株rpsL基因突變；2株多重耐藥菌株均在rpoB基因531位點和katG基因315位點發(fā)生基因突變。篩選了18β

4、-GA、PGA、黃連素Berberine、魚腥草素鈉Sodium houttuyfonate、苦參素Oxymatrine、苦參總堿Banlangen共6種中藥作用于結(jié)核分枝桿菌，選擇出具有良好抗菌活性的中藥單體18β-GA和PGA與抗結(jié)核藥物聯(lián)合，進行藥敏實驗，發(fā)現(xiàn)中藥單體18β-GA聯(lián)合INH、RFP、SM作用于牛源結(jié)核分枝桿菌后MIC值分別顯著下降4-16倍、4-8倍、4-8倍；PGA聯(lián)合INH、RFP、SM后MIC值均下降4-16