1、人溶菌酶作為一種天然蛋白質(zhì)，由于其具有抗菌消炎、防腐保鮮的功能，被廣泛地應(yīng)用于人們地生產(chǎn)生活中，但是從人體組織、器官中提取的人溶菌酶遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能夠滿足人們的需要。因此，近年來(lái)，人們把目光投向了當(dāng)前的基因工程技術(shù)，即利用原核或真核生物作為寄主細(xì)胞，來(lái)實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶的目的。在此基礎(chǔ)上，乳腺生物反應(yīng)器的研究成為了當(dāng)前生物技術(shù)領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，而利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)生物活性蛋白的研究也迅速展開(kāi)。 本實(shí)驗(yàn)的目的在于為乳腺生物反應(yīng)器提供

2、轉(zhuǎn)基因供體細(xì)胞，在以前的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)行了以下研究工作： 1.采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)了牛耳皮膚成纖維細(xì)胞，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染第四代成纖維細(xì)胞，載體為含綠色熒光蛋白和G418抗性基因雙重篩選標(biāo)記的人溶菌酶乳腺特異性表達(dá)載體pEBH。利用PCR和RT-PCR的方法鑒定了轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性成纖維細(xì)胞中目的基因的表達(dá)，結(jié)果得到了陽(yáng)性條帶。說(shuō)明此次轉(zhuǎn)基因細(xì)胞可以作為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物供體細(xì)胞。 2.將以上轉(zhuǎn)基因細(xì)胞用于核移植時(shí)，為了說(shuō)明轉(zhuǎn)基因細(xì)胞

3、對(duì)核移植后的重構(gòu)胚的發(fā)育影響，設(shè)計(jì)了不同的實(shí)驗(yàn)，得到了以下結(jié)果： (1)研究了基因轉(zhuǎn)染對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響。實(shí)驗(yàn)組以G418篩選4周的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞為供體細(xì)胞進(jìn)行核移植，對(duì)照組為非轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組重構(gòu)胚與對(duì)照組相比，融合率，卵裂率沒(méi)有顯著差異，但囊胚發(fā)育率轉(zhuǎn)基因組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，這說(shuō)明基因轉(zhuǎn)染及篩選過(guò)程對(duì)轉(zhuǎn)基因重構(gòu)胚的發(fā)育有不利的影響。 (2)比較不同的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞挑選方法對(duì)轉(zhuǎn)基因克隆胚發(fā)育及陽(yáng)性率的影響。