1、目的：探討同型半胱氨酸硫內(nèi)酯(homocysteine thiolactone,HTL)致血管內(nèi)皮損傷的機(jī)制與過(guò)氧化物酶體增生物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPARγ)的關(guān)系。
　　 方法：(1)離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn):將大鼠胸主動(dòng)脈制備成血管環(huán),分別與羅格列酮(0.1、0.3、1mmol/L)、卡托普利(0.03mmol/L)、夾竹桃麻素(0.03mmol/L)預(yù)

2、孵育30min,再與HTL(10mmol/L)共同孵育60min,檢測(cè)血管內(nèi)皮依賴(lài)性舒張反應(yīng)(endothelium-dependentrelaxation,EDR)和非內(nèi)皮依賴(lài)性舒張反應(yīng)、血管組織中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性。(2)在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn):給大鼠灌胃HTL(50mg/kg/d),造成血管損傷模型,同時(shí)分別給予羅格列酮(10、20、40mg/kg/d)、卡托普利(20mg/kg/d)、夾

3、竹桃麻素(200mg/kg/d)進(jìn)行干預(yù)治療,連續(xù)8周。8周后,檢測(cè)胸主動(dòng)脈EDR和非內(nèi)皮依賴(lài)性舒張反應(yīng)、血清總一氧化氮合酶(TNOS)活性、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活性、NO含量、MDA含量和對(duì)氧磷酶1(PON1)活性以及紅細(xì)胞中SOD活性；RT-PCR法檢測(cè)胸主動(dòng)脈組織中PPARγmRNA水平。(3)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分別與羅格列酮(0.001、0.01、0.1mmol/L

4、)、羅格列酮+PPARγ的特異性阻斷劑GW9662(0.1mmol/L+0.01mmol/L)、夾竹桃麻素(0.1mmol/L)、卡托普利(0.03mmol/L)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)阻斷劑PDTC(0.1mmol/L)預(yù)孵育1h,再加入HTL(1mmol/L)共同孵育24h。用MTT法檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)活力,熒光法檢測(cè)活性氧(ROS)水平和NF-κB的激活,RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中PPARγ mRNA水平,酶聯(lián)免疫吸附法(ELIS

5、A)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液可溶性細(xì)胞間粘附因子-1(sICAM-1)的濃度。
　　 結(jié)果：(1)離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn):HTL能顯著降低乙酰膽堿(Ach)誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈EDR反應(yīng),降低血管組織中NO含量,升高SOD活性和MDA含量,與正常對(duì)照組比差異有顯著性(P<0.01)。羅格列酮(1mmol/L)能顯著改善被HTL降低的血管環(huán)EDR反應(yīng),恢復(fù)血管環(huán)組織中NO含量,抵抗HTL誘導(dǎo)的SOD活性和MDA水平的升高,與HTL損傷組比差異有顯著性

6、(P<0.05或P<0.01)?？ㄍ衅绽蛫A竹桃麻素有與羅格列酮相似的作用。各處理因素對(duì)硝普鈉誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴(lài)性舒張反應(yīng)無(wú)明顯影響,與正常對(duì)照組比均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。(2)在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn):HTL導(dǎo)致了大鼠胸主動(dòng)脈EDR明顯降低、血清MDA水平顯著升高、PON1活性和NO含量顯著降低、胸主動(dòng)脈PPARγ mRNA表達(dá)下調(diào),與正常對(duì)照組比差異有顯著性(P<0.01),但血清TNOS活性、eNOS活性、iNOS活性及紅細(xì)胞SOD活性

7、與正常對(duì)照組比無(wú)明顯改變(P>0.05)。羅格列酮(10、20、40mg/kg/d)劑量依賴(lài)性地保護(hù)HTL損傷的EDR反應(yīng),降低血清MDA含量,升高血清NO含量和PON1活性,上調(diào)胸主動(dòng)脈PPARγ mRNA的表達(dá),與HTL損傷組比差異有顯著性(P<0.05或P<0.01)。卡托普利和夾竹桃麻素也保護(hù)了HTL所損傷的血管EDR反應(yīng),恢復(fù)了HTL所改變的生化指標(biāo),促進(jìn)胸主動(dòng)脈PPARγ mRNA的表達(dá),與HTL損傷組比差異有顯著性(P<0

8、.05或P<0.01)。各處理因素對(duì)硝普鈉誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴(lài)性舒張反應(yīng)無(wú)明顯影響,與正常對(duì)照組比均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。(3)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):HTL能明顯降低內(nèi)皮細(xì)胞活力,增加細(xì)胞內(nèi)ROS水平和NF-κB的活化,升高細(xì)胞培養(yǎng)液中sICAM-1的濃度,下調(diào)細(xì)胞PPARγ mRNA的表達(dá),與正常對(duì)照組比差異有顯著性(P<0.01)。羅格列酮(0.001、0.01、O.1mmol/L)能濃度依賴(lài)性地保護(hù)HTL導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞活力的降低,抑制細(xì)胞

9、內(nèi)ROS水平的增加和NF-κB的活化,降低細(xì)胞培養(yǎng)液中sICAM-1的濃度,恢復(fù)PPARγ mRNA的表達(dá),與HTL損傷組比差異有顯著性(P<0.05或P<0.01),這些保護(hù)作用可被GW9662阻斷。夾竹桃麻素、卡托普利及PDTC對(duì)HTL引起的各個(gè)指標(biāo)的改變也有明顯的改善作用。
　　 結(jié)論：(1)HTL體內(nèi)、體外均可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷；(2)羅格列酮對(duì)HTL導(dǎo)致的血管內(nèi)皮損傷有明顯的保護(hù)作用；(3)HTL誘導(dǎo)的體內(nèi)血管內(nèi)皮損