海洋放線菌的分離、活性篩選和次級(jí)代謝產(chǎn)物研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、天然產(chǎn)物是藥物的重要來源。海洋具有高壓、低溫、高鹽度等極端環(huán)境,生活在其中的海洋放線菌已發(fā)展出獨(dú)特的代謝方式,這不僅確保這類微生物能夠在極端環(huán)境中生存,也造就了其產(chǎn)生新穎的次級(jí)代謝產(chǎn)物的能力。
  本論文采用分散差速離心法與4種選擇性分離培養(yǎng)基,從15份臺(tái)灣海峽海泥樣品中分離到海洋放線菌216株,其中脯氨酸-MOPS培養(yǎng)基與聚乳酸培養(yǎng)基對(duì)于海洋放線菌有良好的分離效果。
  采用固體發(fā)酵與液體發(fā)酵方式,對(duì)216株海洋放線菌進(jìn)行

2、小量發(fā)酵,獲得432份發(fā)酵初提物。以6株細(xì)菌和2株真菌作為指示菌,對(duì)432份發(fā)酵初提物進(jìn)行抗菌活性篩選,有164株(77%)海洋放線菌對(duì)8種指示菌中的一種或幾種具有抑制作用,有75株(35.2%)具有較強(qiáng)抑制作用。
  采用MTT法對(duì)216株海洋放線菌進(jìn)行腫瘤細(xì)胞毒活性篩選,結(jié)果表明,初提物樣品濃度為50μg/mL時(shí),有36株(16.6%)對(duì)HeLa細(xì)胞或HepG2細(xì)胞有抑制作用(抑制率≥50%);樣品濃度為100μg/mL時(shí),有

3、65株(30.5%)對(duì)HeLa細(xì)胞或HepG2細(xì)胞有抑制作用。
  選取89株海洋放線菌進(jìn)行16S rRNA基因序列分析,結(jié)果表明,89株海洋放線菌歸屬于15個(gè)屬,分別為鏈霉菌屬(Streptomyces)、小單孢菌屬(Micromonospora)、諾卡氏菌屬(Nocardia)、疣孢菌屬(Verrucosispora)、馬杜拉放線菌屬(Actinomadura)、野野村氏菌屬(Nonomuraea)、擬諾卡氏菌屬(Nocard

4、iopsis)、假諾卡氏菌(Pseudonocardia)、糖單孢菌屬Saccharomonospora)、韓國生工菌屬(Kribbella)、冢村氏菌屬(Tsukamurella)、普氏菌屬(Prauseria)、鏈孢囊菌屬(Streptosporangium)、珊瑚放線菌屬(Actinocorallia)和鏈單孢菌屬(Streptomonospora)。
  選取3株海洋稀有放線菌進(jìn)行次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究,共分離到17個(gè)化合物,

5、其中有6個(gè)為新化合物。
  從菌株H-88(Kribbella jejuensis)中分離到4個(gè)化合物,分別為1-甲基-2-喹諾酮(K-3)、吡嗪類化合物(K-6)和2個(gè)環(huán)二肽類化合物(K-8和K-9)。
  從菌株5-58(Nonomuraea ferruginea)分離到6個(gè)化合物,分別為3個(gè)吲哚類化合物(m-2、m-8和m-20)、2個(gè)二糖類化合物(m-25和m-26)和呋喃類化合物(m-30),其中m-25、m-26

6、和m-30為新化合物。
  從菌株H-100(Actinomadura cremea)分離到7個(gè)化合物,分別為3個(gè)萜類化合物(a-1、a-2-1和a-2-2)、Glucopyranoside(a-28)、呋喃類化合物(a-33)、二糖類化合物(a-35)和苯-y-吡喃酮衍生物(a-36),其中a-1、a-2-2和a-35為新化合物。
  對(duì)17個(gè)化合物進(jìn)行抗菌活性(濾紙片法)、腫瘤細(xì)胞毒活性(MTT法)測(cè)定。在1μg/mL和

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