1、第一部分、外周血hEPCs分離、培養(yǎng)及鑒定
　　 目的：分離、培養(yǎng)及純化人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞，并進(jìn)行鑒定。
　　 方法：10例20-40歲男性骨科取內(nèi)固定患者，無(wú)髖部外傷史，無(wú)心血管疾病史，無(wú)可能存在有新生血管形成狀態(tài)如腫瘤或腎病史。抽取外周血20ml，F(xiàn)icoll密度梯度離心法分離培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞，然后采用形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞分析、Dil-acLDL吞噬實(shí)驗(yàn)及UEA-1結(jié)合實(shí)驗(yàn)等鑒定。
　　 結(jié)果：培養(yǎng)3天后，部分

2、細(xì)胞呈長(zhǎng)梭狀;培養(yǎng)7天后出現(xiàn)典型的放射狀“克隆集落”樣結(jié)構(gòu)。培養(yǎng)10天后，用EPCs特異性標(biāo)記物CD133和CD34進(jìn)行免疫熒光鑒定，共聚焦顯微鏡下可觀察到所有細(xì)胞均同時(shí)表達(dá)CD133和CD34;EPCs能攝取DiI-ac-LDL，熒光顯微鏡下可觀察到紅色熒光;而且還能結(jié)合FITC-UEA-1，熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光。
　　 結(jié)論：利用密度梯度離心法從人外周血可分離、獲得純度較高內(nèi)皮祖細(xì)胞。
　　 第二部分、不同種

3、類(lèi)及濃度糖皮質(zhì)激素對(duì)外周血hEPCs活性及成血管功能影響
　　 目的：觀察不同種類(lèi)和濃度糖皮質(zhì)激素對(duì)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞活性及其最重要功能—形成新生血管能力的影響。
　　 方法：10例20-40歲男性骨科取內(nèi)固定患者，無(wú)髖部外傷史，無(wú)心血管疾病史，無(wú)可能存在有新生血管形成狀態(tài)如腫瘤或腎病史。抽取外周血20ml，分離、培養(yǎng)并鑒定hEPCs。然后分別加入0、0.4、4、40、400及4000μg/ml強(qiáng)的松龍及甲基強(qiáng)的松龍，72

4、小時(shí)后上酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)檢測(cè)，采用t檢驗(yàn)分析OD值差異。將細(xì)胞分為兩組，組1分別加入0.4μg/ml強(qiáng)的松龍及甲基強(qiáng)的松龍;組2分別加入4000μg/ml強(qiáng)的松龍及甲基強(qiáng)的松龍，采用MatrixMatrigel檢測(cè)hEPCs形成新生血管，利用LeicaQ-Win圖像分析軟件分析圖像并采用t檢驗(yàn)分析新生血管直徑差異。
　　 結(jié)果：強(qiáng)的松龍及甲基強(qiáng)的松龍4000μg/ml時(shí)hEPCs活性最低，甲基強(qiáng)的松龍組細(xì)胞活性更低，兩組比較

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.01);兩組在濃度為4000μg/ml時(shí)均無(wú)新生血管形成;在濃度為0.4μg/ml時(shí)，兩組均可形成新生血管，但兩組新生血管直徑有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，甲基強(qiáng)的松龍組新生血管直徑更細(xì)(p＜0.02)。
　　 結(jié)論：強(qiáng)的松龍及甲基強(qiáng)的松龍?jiān)?000μg/ml時(shí)對(duì)hEPCs活性抑制最強(qiáng)，但甲基強(qiáng)的松龍有更強(qiáng)抑制性且兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;強(qiáng)的松龍及甲基強(qiáng)的松龍?jiān)?000μg/ml時(shí)完全抑制hEPCs形成新生血管，在0.4μg

6、/ml時(shí)兩組形成新生血管直徑有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，甲基強(qiáng)的松龍組新生血管直徑更細(xì)。
　　 第三部分、糖皮質(zhì)激素相關(guān)性股骨頭壞死患者外周血hEPCs功能研究
　　 目的：觀察糖皮質(zhì)激素相關(guān)性股骨頭壞死患者外周血hEPCs兩大重要功能—遷移能力和形成新生血管能力。
　　 方法：10例20-40歲通過(guò)MRI確診男性激素相關(guān)性股骨頭壞死患者，無(wú)心血管疾病史，無(wú)可能存在有新生血管形成狀態(tài)如腫瘤或腎病史。抽取外周血20ml，分離、培

7、養(yǎng)并鑒定hEPCs。然后應(yīng)用NeuroProbeZigmondChamber細(xì)胞遷移板，加入基質(zhì)細(xì)胞趨化因子-1α(SDF-1α，stromalcell-derivedfactor-1α)，連續(xù)拍照24小時(shí)，利用LeicaQ-Win圖像分析軟件分析圖像并采用t檢驗(yàn)分析遷移距離差異。采用MatrixMatrigel檢測(cè)hEPCs形成新生血管，利用LeicaQ-Win圖像分析軟件分析圖像并采用t檢驗(yàn)分析新生血管直徑差異。
　　 結(jié)果