1、背景和目的:
　　 目前,惡性腫瘤仍是世界上對(duì)人類健康危害最大的疾病之一。世界衛(wèi)生組織最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,目前全球平均每8個(gè)死亡病例中就有1人死于癌癥。我國(guó)衛(wèi)生部數(shù)據(jù)顯示,中國(guó)內(nèi)地每年新發(fā)癌癥約200萬(wàn)例,死亡超過140萬(wàn)例,每5位死亡病人中有一人死于癌癥。雖然現(xiàn)有許多種化療藥物,但都存在著自身的治療局限性及毒副作用。因此,開發(fā)安全有效的抗腫瘤藥物是一項(xiàng)緊迫的任務(wù)。FNC(2'-脫氧-2'-氟-4'-疊氮胞苷)是一種新型的核苷類似

2、物。我們前期的研究結(jié)果表明,多種人癌細(xì)胞經(jīng)高劑量(2 mg/kg)和低劑量(0.5 mg/kg)FNC處理后,細(xì)胞周期被阻滯于G1期或S期,并誘導(dǎo)其凋亡。FNC能夠在體外抑制多種人癌細(xì)胞的增殖,包括B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤、肺腺癌和急性髓細(xì)胞白血病等。有關(guān)FNC這些作用的確切分子機(jī)制尚不清楚。眾所周知,細(xì)胞周期調(diào)控因子的異常表達(dá)可以通過改變細(xì)胞周期引起細(xì)胞無(wú)限增殖而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生,異常的細(xì)胞周期進(jìn)程是腫瘤發(fā)生的重要因素。通常,大部分腫瘤的形

3、成都源于細(xì)胞周期G1/S轉(zhuǎn)換期出現(xiàn)了問題。
　　 本研究的目的是建立肝癌H22荷瘤小鼠模型,研究FNC對(duì)荷H22小鼠腫瘤的抑制作用,并進(jìn)一步探討其抗腫瘤的分子機(jī)制,為其開發(fā)為臨床抗腫瘤治療藥物提供理論基礎(chǔ)。
　　 材料與方法:
　　 本課題采用建立肝癌H22荷瘤小鼠模型,連續(xù)尾靜脈注射FNC8天后剖瘤稱重,計(jì)算抑瘤率:以cyclin D1、cyclin E和Rb為指標(biāo),分別測(cè)量瘤體內(nèi)cyclinD1、cyclin

4、 E和Rb的基因和蛋白表達(dá)量的變化,初步研究其抗腫瘤作用及分子機(jī)制。本研究共分兩部分,其內(nèi)容如下:
　　 第一部分 FNC對(duì)肝癌H22實(shí)體瘤的抑制作用
　　 用傳代良好第7～8天的H22瘤細(xì)胞接種于KM小鼠右腋下,每只動(dòng)物接種2.4×106個(gè)細(xì)胞,24h后隨機(jī)分為空白對(duì)照組(生理鹽水)、5FU(15 mg/kg)、FNC低(1 mg/kg)、FNC中(2 mg/kg)、FNC高(3 mg/kg)劑量組,連續(xù)尾靜脈用藥8天

5、后剖瘤稱重計(jì)算各組的抑瘤率,抑瘤率(％)=(對(duì)照組平均瘤重-用藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100%,評(píng)價(jià)FNC體內(nèi)的抗腫瘤療效。
　　 第二部分 FNC體內(nèi)抗腫瘤作用的分子機(jī)制研究
　　 用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)法檢測(cè)瘤組織內(nèi)細(xì)胞周期蛋白cyclinD1、cyclin E和抑癌蛋白R(shí)b mRNA的表達(dá)量;用熒光倒置顯微鏡檢測(cè)瘤組織內(nèi)cyclin D1、cyclin E和磷酸化Rb(ser780)蛋白的表

6、達(dá)量,從而探究FNC在基因和蛋白水平上對(duì)cyclin D1、cyclin E和Rb(ser780)表達(dá)產(chǎn)生的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1:通過計(jì)算抑瘤率,FNC(1,2,3 mg/kg)和5FU(15 mg/kg)對(duì)荷瘤小鼠肝癌H22抑瘤率依次為45.96%、52.53%、62.12%and63.13%。
　　 2:FNC各劑量組瘤體內(nèi)cyclin D1 mRNA的表達(dá)均低于空白對(duì)照組,大劑量(3.0 mg/k

7、g)組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(p＜0.05)。FNC各劑量cyclinE mRNA的表達(dá)都高于空白對(duì)照組,并隨藥物濃度的升高而升高,大劑量組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(p＜0.05)。FNC各劑量Rb mRNA的表達(dá)量與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。FNC各劑量組cyclin E蛋白的表達(dá)與空白對(duì)照組相比明顯降低,且中劑量和大劑量組有顯著性差異((p＜0.05)。FNC各劑量組磷酸化Rb蛋白表達(dá)與模型組相比,中劑量和高劑量(2.0,