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文檔簡介
1、利用蛋白免疫印跡技術(Western blotting)對3只白色山羊、3只黑色山羊和3只棕色山羊皮膚組織Agouti基因所編碼ASIP蛋白表達量的差異進行研究,結果顯示ASIP在不同毛色山羊皮膚組織中表達量為:白色山羊(0.94±0.19)>棕色山羊(0.74±0.08)>黑色山羊(0.57±0.18)。ASIP表達量在白色和黑色(P=0.03)山羊皮膚組織之間差異顯著,在白色和棕色(P=0.17)、棕色和黑色(P=0.21)山羊皮膚
2、組織之間差異不顯著。
已獲得的12847bp山羊Agouti基因序列與綿羊CH243-455O4反向互補序列進行比對,二者相似性為97%。以綿羊CH243-455O4反向互補序列為模板設計引物進行PCR擴增:利用7對引物擴增CH243-455O4反向互補序列中102364-118525bp的位置,白色、黑色山羊擴增獲得的序列長度分別為16161bp、16226bp,所得序列與12847bp的序列進行拼接,分別得到長度為2779
3、3bp、27858bp的白色、黑色山羊Agouti基因的基因組序列;利用3對引物分別擴增CH243-455O4反向互補序列中包括53571-53651、57572-57650、64870-64928這3段的序列,白色、黑色山羊獲得的包含此三段序列的長度分別為:364bp、2625bp、1296bp;367bp、2622bp、1298bp。Spidey軟件將綿羊mRNA(NM_001134303.1)與擴增獲得的4段Agouti基因的基因
4、組序列進行外顯子、內含子預測,結果顯示:目前獲得的山羊Agouti基因5'非翻譯區(qū)序列有4段與綿羊mRNA序列相匹配,長度分別為:88bp、180bp、81bp、79bp。推測山羊Agouti基因5'非翻譯區(qū)可能由4個或更多不同長度不編碼蛋白質的外顯子組成。
選用4只白色、3只黑色山羊皮膚組織,通過5'RACE實驗對山羊mRNA進行測序研究,得到:白色山羊(B2) Agouti基因5'非翻譯區(qū)外顯子1存在5種可變剪接形式,分別
5、為It、It'、IA、2C、IE;黑色山羊(H1、H2) Agouti基因5'非翻譯區(qū)外顯子1存在2種可變剪接形式,分別為It、It';不同類型剪接體的序列長度不同,白色、黑色山羊中It、It'均存在不同程度的缺失;根據(jù)不同毛色山羊所具有的不同剪接體類型推斷:IA、2C、IE可變剪接體可能是山羊白色形成的原因。白色山羊(B1)69-109bp這段序列在Agouti基因外顯子4上也檢測到,設計相應引物進行PCR擴增,驗證得出白色山羊(B1
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