1、分類(lèi)號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：10165201211001079遣享師耗火擎碩士學(xué)位論文⑦M(jìn)Pl基因在遼寧絨山羊皮膚的表達(dá)研究作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：張麗麗動(dòng)物學(xué)動(dòng)物遺傳育種金梅教授2015年3月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要遼寧絨山羊是我國(guó)特有的品種，并且是禁止基因外流的寶貴資源，其羊絨產(chǎn)量居全國(guó)首位，因此，研究與羊絨相關(guān)基因的功能就更具實(shí)際生產(chǎn)意義。前期，我們實(shí)驗(yàn)室通過(guò)建庫(kù)、測(cè)通獲得了遼寧絨山羊的新基因MPl(MEK

2、Partner1)的全長(zhǎng)序列，首先對(duì)MPl基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，檢測(cè)其核酸及氨基酸的同源性，建立進(jìn)化樹(shù)等。然后通過(guò)RTPCR檢測(cè)MPl基因在各組織中的表達(dá)，再利用qPCR方法檢測(cè)其在毛囊生長(zhǎng)的不同時(shí)期的初、次級(jí)毛囊中的表達(dá)含量，最后對(duì)絨山羊興盛期皮膚進(jìn)行原位雜交并對(duì)其進(jìn)行表達(dá)位點(diǎn)分析。為進(jìn)一步研究MPl基因是否與羊絨細(xì)度之間存在某種關(guān)系，利用本實(shí)驗(yàn)室已有的Noggin基因RNA干擾的慢病毒，感染遼寧絨山羊皮膚細(xì)胞后，再利用qPCR檢測(cè)

3、其對(duì)MPl基因表達(dá)的影響，為培育出具有優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀的絨山羊提供一定的分子理論基礎(chǔ)。結(jié)果如下：(1)MPl基因編碼的蛋白質(zhì)包含124個(gè)氨基酸，分子量為1364KD，是一個(gè)疏水性蛋白。MPl含有a螺旋結(jié)構(gòu)(2581％)、延伸鏈結(jié)構(gòu)(3387％)和無(wú)規(guī)卷曲(4032％)。無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)域，無(wú)信號(hào)肽。MPI的氨基酸序列包含一個(gè)保守的MAPKKIInt結(jié)構(gòu)域，含有有3個(gè)可能成為磷酸化位點(diǎn)的Ser。RTPCR檢測(cè)結(jié)果顯示：僅在皮膚、心臟中MPl基因有表

4、達(dá)，而在肝、腎、肺、脾中未發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。qPCR檢測(cè)毛囊在興盛期時(shí)，MPl基因在次級(jí)毛囊的表達(dá)量為初級(jí)毛囊的165倍，退行期MPl基因在次級(jí)毛囊的表達(dá)量為初級(jí)毛囊的325倍。原位雜交分析發(fā)現(xiàn)：MPl在內(nèi)根鞘上有明顯的表達(dá)，在毛干、外根鞘以及毛囊乳突中無(wú)表達(dá)。(2)成功構(gòu)建出Noggin基因RNAi的慢病毒載體，Noggin基因被干擾后，qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MPl基因起負(fù)調(diào)控作用，MPl基因的相對(duì)表達(dá)量出現(xiàn)上調(diào)的趨勢(shì)。由以上結(jié)果可以得出以下結(jié)論