1、研究意義
　　異體器官移植已成為臟器功能衰竭治療中的一種常規(guī)治療方案。在器官移植領域，目前主要使用免疫抑制藥物來避免、減輕和逆轉排斥反應，但是使用這些藥物的同時也帶來了一系列問題，如感染幾率增加、惡性腫瘤發(fā)病率提高、費用昂貴等。盡管如此，這些方法仍不能避免慢性移植物功能衰竭，因此，大量研究致力于尋求一種更好的方法建立免疫耐受。經(jīng)骨髓移植建立混合嵌合體被證實是建立異體移植免疫耐受的理想方法之一。然而，在誘導混合嵌合體的過程中，受體必

2、須經(jīng)過輻射、放療及化療等預處理方案，以提高造血干細胞移植成活率，這點很大程度上限制了該技術的推廣應用。到目前為止，仍沒有一種切實可靠、適用于臨床的預處理方案。
　　BMSC在體外易于培養(yǎng)擴增，BMSCs的低免疫原性與免疫調(diào)節(jié)兩方面特性使得它在治療移植排斥方面具有潛在優(yōu)勢。目前，人們已經(jīng)利用BMSCs的免疫調(diào)節(jié)特性對自身免疫性疾病、全身炎癥反應綜合癥及GVHD等多種疾病展開治療，并取得良好的效果?；谀壳巴ㄟ^骨髓移植建立嵌合體尚無低

3、毒性預處理方案，本研究擬嘗試用BMSCs對受體進行預處理，然后進行骨髓移植，觀察是否可以成功建立混合嵌合體并形成免疫耐受?；赥h17/Treg細胞在免疫排斥與耐受中的重要地位，本研究進一步通過體外實驗研究BMSCs對Th17/Treg細胞分化的影響，并對其機制進行探索。
　　材料與方法
　　1.將供體（Balb/c）小鼠來源BMSCs進行體外培養(yǎng)擴展，通過尾靜脈向受體輸注，然后將供體骨髓向受體移植，觀察在不使用免疫毒性藥物

4、的情況下是否可以移植成活形成嵌合體；在此基礎上，將供體及第三方（ICR）小鼠來源皮片向受體移植，觀察其存活情況，分析是否形成免疫耐受；
　　2.體外培養(yǎng)受體CD4+T細胞作為反應細胞，獲取供體脾細胞為刺激細胞，二者進行單向混合淋巴細胞反應，觀察在異體抗原刺激下初始T細胞向Th17/Treg細胞分化情況；進一步在該體系中加入BMSCs進行混合培養(yǎng)，觀察BMSCs對Th17/Treg細胞分化的影響，通過對細胞因子等進行檢測，初步探討其

5、可能機制；
　　3.通過1-D-MT抑制BMSCs細胞內(nèi)IDO功能，觀察BMSCs對Th17/Treg細胞分化的影響，分析IDO在BMSCs干預Th17/Treg細胞分化中的作用。
　　結果
　　1.BMSCs對受體預處理后進行骨髓移植，受體外周血中可持續(xù)檢測到供體來源細胞，在移植4周后，供體細胞占外周血總細胞約20-25％；在該模型上進行皮膚移植，發(fā)現(xiàn)供體來源皮膚可長期存活，值得關注的是，供體來源皮膚的毛發(fā)在移植后可

6、持續(xù)正常生長，提示未發(fā)生移植物慢性功能喪失。病理切片顯示，供體來源皮片結構完整，僅有少量單個核細胞浸潤，而第三方來源皮片則出現(xiàn)表皮脫落，基底層大量單個核細胞浸潤等；通過取脾細胞進行單項混合淋巴細胞反應，發(fā)現(xiàn)成功建立嵌合體的小鼠脾細胞對于供體抗原具有低反應性，而對第三方抗原反應性正常；
　　2.通過單項混合淋巴細胞反應結果發(fā)現(xiàn)，異體抗原刺激初始T細胞，可促使其向Th17/Treg細胞分化；BMSCs干預后，反應性T細胞增殖明顯受抑制

7、，同時Th17細胞比例減少，而Treg細胞增多，進一步分析發(fā)現(xiàn)，BMSCs可降低反應體系中IL-1β、IL-2、IL-6及IL-17，同時提高IL-10、TGFβ1及IDO；
　　3.通過1-D-MT預孵育可抑制BMSCs細胞內(nèi)IDO功能，該BMSCs對T細胞增殖及Th17/Treg細胞分化的影響作用明顯降低，但培養(yǎng)體系內(nèi)介導TGFβ1及IL-6水平與正常BMSCs組比較未見明顯差異。
　　結論
　　在不使用任何免疫毒