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文檔簡介
1、目的:初步探討茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MJ)對胃癌SGC-7901細胞生長的影響及機制。
方法:人胃癌SGC-7901細胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%小牛血清、青霉素-鏈霉素溶液(100X) RPMI1640培養(yǎng)液中,在37℃、5%CO2及飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實驗分組:陰性對照組、溶劑對照組、茉莉酸甲酯組(MJ0.5 mmol/L,1.0 mmol/L,2.0mmol/L)、陽性對照組(DDP2.5 mg/L)、
2、辣椒素受體拮抗劑(capsazepine,Cap)預(yù)處理組。(1)四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測各組細胞作用6h、12 h和24 h體外增殖情況;(2) Hoechst33258熒光染色法觀察凋亡細胞核的形態(tài)學變化;(3)AnnexinV-FITC/PI雙染流式細胞術(shù)檢測細胞的凋亡率;(4)蛋白質(zhì)印跡方法檢測凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表達;(5)免疫細胞化學法檢測凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表達。
結(jié)果:
3、(1)不同濃度的茉莉酸甲酯作用于胃癌SGC-7901細胞株6h、12h和24 h后,細胞生長受到不同程度的抑制。抑制率隨濃度的升高而升高(r=0.983,P<0.05);隨時間的延長而升高(r=0.923,P<0.05),與溶劑對照組和陰性對照組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),故呈劑量——時間依賴關(guān)系。在相同作用時間下,1.0 mmol/L,2.0 mmol/L MJ抑制效果明顯強于2.5 mg/L DDP陽性對照組,差異具有
4、統(tǒng)計學意義(P<0.05)。辣椒素受體拮抗劑預(yù)處理后,MJ對腫瘤細胞的抑制作用被消除,與單獨茉莉酸甲酯組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)藥物作用24h后,行Hoechst33258染色可見陰性對照組和溶劑對照組細胞細胞核呈卵圓形,染色均勻,茉莉酸甲酯組可見部分細胞核熒光增強,胞核縮小呈濃縮現(xiàn)象,細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、熒光顯著增強,并有部分細胞核邊緣化,甚至裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。辣椒素受體拮抗劑預(yù)處理后,與單獨MJ組
5、相比,凋亡細胞數(shù)明顯減少。(3)流式細胞術(shù)分析顯示:陰性對照組和溶劑對照組凋亡率相近,兩者差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。0.5 mmol/L,1.0 mmol/L及2mmol/L低中高三個濃度MJ作用于SGC-7901細胞24 h后,隨著MJ濃度的增加,細胞凋亡率明顯升高(r=0.920,P<0.05),與溶劑對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),1.0 mmol/L,2.0 mmol/L MJ組凋亡率高于DDP陽性對照組,
6、兩者相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);辣椒素受體拮抗劑預(yù)處理后,凋亡率下降,與單獨MJ組相比,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(4)蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果顯示,Pro-Caspase-9、Pro-Caspase-3及Caspase-3、Caspase-9的表達量增加,與溶劑對照組和陰性對照組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);辣椒素受體拮抗劑預(yù)處理后,凋亡蛋白相對表達量下降,與單獨MJ組相比,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(5)
7、免疫細胞化學染色結(jié)果顯示:Bcl-2、Bax在SGC-7901細胞胞漿中均有表達;2mmol/LMJ作用24h后,Bcl-2蛋白表達降低,Bax蛋白表達升高,與溶劑對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);辣椒素受體拮抗劑預(yù)處理后,Bcl-2蛋白表達升高,Bax蛋白表達降低,與單獨MJ組相比,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:茉莉酸甲酯對人胃癌SGC-7901細胞株具有生長抑制、誘導(dǎo)凋亡作用。茉莉酸甲酯誘導(dǎo)人胃癌SG
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