1、目的: 摸索臍血來源的造血干細胞植入NOD/SCID小鼠達到高水平人源化所需要的條件。探討植入后人的基因能否在NOD/SCID小鼠中表達并長期穩(wěn)定的存在。期待利用該條件建立某些基因缺陷疾病的動物模型。 方法: 實驗分為兩個階段進行。第一步，比較予400cGy單次照射和400cGy分割照射移植后小鼠的生存情況。選擇最佳照射方式作為第二階段實驗的照射的依據(jù)。第二步，分選臍血(CB)單個核細胞(MNC)2×108/ml

2、，加入rHuSCF 100 ng/ml，照射后8小時內(nèi)通過尾靜脈植入小鼠。移植后+7至+14天皮下注射rhG-CSF注射液0.1ml(0.1ug/天)。監(jiān)測小鼠外周血的白細胞的動態(tài)計數(shù)了解植入的情況。用流式細胞技術(shù)檢測小鼠外周血中CD45+抗原的動態(tài)表達，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)了解人Cart-1基因的表達情況。 結(jié)果:生存分析表明400cGy分割照射比單次照射移植的存活率高。移植后4-6周小鼠的外周血白細胞緩慢恢復(fù)，6周時基本達

3、到照射前的水平(median： 1.40×109/L)。移植后4-16周經(jīng)流式細胞儀的監(jiān)測小鼠外周血CD45+抗原的表達情況，提示：4周始出現(xiàn)表達(7.5％-22％)，8周達到高水平的表達(66％-82％)， 16周仍有較高的表達量(23.1％-60.3％)。10周時所有存活的小鼠經(jīng)PCR均檢測到人Cart-1基因的表達。 結(jié)論:400cGv分割照射為適合本研究的最佳照射方式，其有助于造血干細胞的植入，并減少照射對正常組織的損傷