1、目的：探討轉(zhuǎn)染吲哚胺2，3-雙加氧酶(indoleamine2，3-dioxygenase，IDO)基因并獲得高表達(dá)的小鼠骨髓來源成熟樹突狀細(xì)胞(DendriticCell，DC)聯(lián)合色氨酸代謝產(chǎn)物對(duì)同種異系T淋巴細(xì)胞增殖的影響，為臨床預(yù)防器官移植排斥反應(yīng)，成功誘導(dǎo)移植后免疫耐受開辟新途徑。
　　方法：(1)應(yīng)用RT-PCR技術(shù)從小鼠附睪中擴(kuò)增IDO基因序列，構(gòu)建IDO真核表達(dá)載體pEGFP-N1-IDO質(zhì)粒。(2)采用培養(yǎng)基細(xì)胞

2、因子選擇法體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源DC，流式細(xì)胞儀檢測DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c的表達(dá)情況。(3)利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法使pEGFP-N1-IDO質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠成熟DC，倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染后DC中綠色熒光蛋白的表達(dá)，RT-PCR及免疫細(xì)胞化學(xué)法分別在mRNA和蛋白水平檢測IDO的表達(dá)。(4)免疫磁珠法陽性分選同種異系小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測CD4+T淋巴細(xì)胞的陽性率。(5)以轉(zhuǎn)染IDO基因的DC作為

3、刺激細(xì)胞，小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞行單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，同時(shí)增加培養(yǎng)基中色氨酸產(chǎn)物的量，MTT法檢測CD4+T淋巴細(xì)胞的增殖情況。使用SPSS17.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：(1)成功構(gòu)建含小鼠IDO基因的真核表達(dá)載體pEGFP-N1-IDO質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染DC獲得表達(dá)。(2)經(jīng)體外培養(yǎng)，每只小鼠可獲得5-6×106個(gè)具備典型樹突狀結(jié)構(gòu)的骨髓來源DC，其表面高表達(dá)CD80(97.7％)、CD86(83.6％)、

4、MHC-Ⅱ(94.6％)、CD11c(87.9％)。(3)免疫磁珠法可分選出純度達(dá)90％以上的CD4+T細(xì)胞。(4)IDO+DC組及IDODC+色氨酸產(chǎn)物(KYN、3-HK、3-HAA)組均明顯抑制CD4+T細(xì)胞增殖，而IDO+DC+色氨酸產(chǎn)物組較前兩者對(duì)其增殖抑制更顯著(P<0.001)。其中以3-HAA的作用最明顯，所需濃度最低。轉(zhuǎn)染IDO質(zhì)粒的DC與色氨酸代謝產(chǎn)物對(duì)CD4+T細(xì)胞的增殖抑制具有疊加作用。
　　結(jié)論：高表達(dá)ID