1、人外周血培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞轉(zhuǎn)染目的基因的實驗研究乙型肝炎病毒(hepatitisBvirusHBV)感染是一個世界范圍內(nèi)的高感染率、高危害性的疾?。喝蚣s有3.5億HBV感染者，僅我國乙肝病毒感染率就達(dá)約60-70﹪，其中15-25﹪感染者最終會死于HBV相關(guān)性疾病，這使得HBV感染成為危害人類最嚴(yán)重的疾病之一。 現(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)在持續(xù)性HBV感染的發(fā)病機(jī)制中，特異性細(xì)胞免疫能力的低下或不足起著至關(guān)重要的作用，而樹突裝細(xì)胞(DC)作為

2、目前已知的人體內(nèi)最強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞，機(jī)體免疫反應(yīng)的始動者，通過參與抗原的攝取加工與遞呈，對誘導(dǎo)免疫應(yīng)答起著關(guān)鍵性的作用，與慢性乙型肝炎的發(fā)病機(jī)理和治療都有十分緊密的聯(lián)系。以DC為基礎(chǔ)的免疫治療正成為慢性HBV感染研究的新方向。 鑒于HBcAg是機(jī)體細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(Tc)識別和攻擊HBV感染細(xì)胞的主要靶抗原，本研究用外周血以適當(dāng)方法獲得誘導(dǎo)成熟的DC后，以脂質(zhì)體PEI為介質(zhì)，介導(dǎo)包含有編碼HBcAg目的基因的質(zhì)粒pJW4303

3、轉(zhuǎn)染入DC，構(gòu)建樹突狀細(xì)胞疫苗，經(jīng)Western-Blotting技術(shù)驗證病毒基因表達(dá)的目的蛋白，以期增強(qiáng)DC的提呈功能。 實驗結(jié)果：一.分離人外周血，用HES沉降法獲得單個核細(xì)胞(PBMC)，再以以貼壁法去除淋巴細(xì)胞得到單核細(xì)胞。聯(lián)合應(yīng)用GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞(DC)，第五天收獲形態(tài)較為典型的DC。 二.用大腸桿菌擴(kuò)增包含有編碼HbcAg的目的基因的質(zhì)粒PJW4303，以堿裂解法獲取質(zhì)粒DNA(小提)