1、蛋白激酶C(PKC)是一類Ser／Thr蛋白激酶家族,參與細(xì)胞內(nèi)多種功能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,包括增殖、分化、凋亡以及血管生成等。PKC目前已發(fā)現(xiàn)至少11種亞型,按其對Ca2+和甘油二酯(DAG)的依賴性不同,可以分為三個(gè)主要的亞家族:經(jīng)典型PKC,新型PKC,非經(jīng)典型PKC以及PKCμ。
　　 早期研究表明。PKC能夠被促腫瘤劑佛波酯(PMA)激活,隨后的大量研究進(jìn)一步證實(shí)PKC在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中均發(fā)揮著重要作用,因此將其作

2、為靶點(diǎn)開發(fā)抗腫瘤藥物成為目前研究的熱點(diǎn)。
　　 目前已開發(fā)了多種PKC抑制劑,如UCN-01、PKC412、G06976、Rottlerin、Bryostatin-1、Aprinocarsen等,其中已有一些抑制劑和寡聚核苷酸藥物進(jìn)入臨床抗腫瘤研究,但是也帶來了許多問題,包括藥物體內(nèi)藥效仍不十分理想,靶點(diǎn)專一性較差,毒副作用較強(qiáng),易產(chǎn)生耐藥性等,針對PKC靶點(diǎn)尋找高效低毒的抗腫瘤藥物仍然具有現(xiàn)實(shí)意義與挑戰(zhàn)性。因此,建立以PKC為

3、分子靶點(diǎn)的抑制劑篩選模型,將為開發(fā)抗腫瘤藥物提供活性篩選的技術(shù)平臺(tái)。
　　 實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)代號(hào)為MDZ-03的化合物對PKCβⅡ激酶活性表現(xiàn)出明顯的抑制作用,并進(jìn)行了初步的細(xì)胞水平抗腫瘤評(píng)價(jià)。本論文旨在對MDZ-03的體外體內(nèi)抗腫瘤作用進(jìn)行進(jìn)一步評(píng)價(jià),考察其對多種細(xì)胞株的增殖抑制作用以及對細(xì)胞周期的影響,并對其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討。此外,建立基于生物發(fā)光原理的PKCα和PKCβⅡ分子水平抑制劑篩選模型,對MDZ-03的一系列類

4、似物進(jìn)行了篩選,以期尋找靶向更明確,作用更有效的PKC抑制劑抗腫瘤先導(dǎo)化合物。
　　 第—部分:MDZ-03的抗腫瘤作用及機(jī)制研究
　　 本部分實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)了MDZ-03的體外體內(nèi)抗腫瘤作用,考察其對多種細(xì)胞株的增殖抑制作用以及對細(xì)胞周期的影響,并對其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討。結(jié)果觀察到MDZ-03在體外對人慢性髓系白血病細(xì)胞K562、小鼠白血病細(xì)胞P388、人肺腺癌細(xì)胞A549、人乳腺癌細(xì)胞435有選擇性增殖抑制作用；MDZ

5、-03作用使A549細(xì)胞漿出現(xiàn)大量空泡；流式細(xì)胞術(shù)表明MDZ-03將A549細(xì)胞周期特異性阻滯于G0／G1期；MDZ-03對荷A549裸小鼠異體移植瘤有體內(nèi)抑瘤作用；WesternBlot考察MDZ-03對A549細(xì)胞內(nèi)PKC及其相關(guān)信號(hào)分子蛋白的影響,發(fā)現(xiàn)MDZ-03對PKCβⅡ、PKCδ、PKCθ均有抑制作用,并且可能不是通過凋亡通路,而是通過自嗜介導(dǎo)細(xì)胞的死亡過程。
　　 第二部分:基于生物發(fā)光原理的PKCα和PKCβⅡ分