1、本試驗從富含油脂的土壤中篩選到一株產(chǎn)脂肪酶的芽孢桿菌菌株3EA1-1，經(jīng)紫外誘變其酶活力達到50.5U/mL，命名為EA-300-A。對該菌株進行16SrDNA序列分析，并結合生理生化和菌落形態(tài)特征，最后鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。
　　對上述菌株進行體外模擬人工胃腸道的耐受性研究。研究發(fā)現(xiàn):EA-300-A菌株對人工胃液、腸液和膽酸鹽培養(yǎng)基的耐受性比較強，同時通過安全性實驗，已經(jīng)基本證明它對動物沒有毒

2、害作用。
　　上述研究表明，菌株Bacillus subtilis EA-300-A具有較高的酶活性，可以耐受人工胃腸液，并且生物安全，表明該菌株具有進一步大規(guī)模應用的潛力。為了便于后期菌劑生產(chǎn)，本試驗對菌株進行了產(chǎn)芽孢條件優(yōu)化，單因素試驗和正交試驗結果表明，EA-300-A菌株最適的產(chǎn)芽孢發(fā)酵條件為:2.0％玉米粉，1.0％黃豆餅粉，0.3％ CaCl2·2H2O，Na2HPO4·12H2O0.4％，NaH2 PO4·2H2O0

3、.2％，初始pH8.0，種齡12h，接種量10％，裝量50mL/250mL。
　　為了驗證EA-300-A菌劑在飼喂上的效果，選取蛋公雞為研究對象，檢測菌劑在雞增重、料重比、各種消化酶及微生物數(shù)量的影響。首先參照菌株芽孢條件優(yōu)化結果生產(chǎn)菌劑。選擇1日齡健康蛋公雞150羽，隨機分為3組，每組50羽。對照組在全價飼料的基礎上添加1％大豆油，作為基礎日糧，試驗組1在基礎日糧的基礎上添加0.5％EA-300-A菌劑(5×108CFU/g)

4、，試驗組2在基礎日糧的基礎上添加1％ EA-300-A菌劑(5×108CFU/g)。飼養(yǎng)試驗為期42天，預飼7d后進入試驗期。飼喂期采用國標法對盲腸中大腸桿菌、乳酸菌、雙歧桿菌進行計數(shù)，測定十二指腸中脂肪酶活力的變化，并計算糞樣中粗蛋白以及粗脂肪和粗灰分含量。飼喂試驗結果顯示:在飼糧中添加1％產(chǎn)酶菌劑雞平均日增重提高23.06％，料重比降低19.60％;經(jīng)過檢測，雞十二指腸內(nèi)脂肪酶活性顯著提高并且各營養(yǎng)物質(zhì)在糞便中的殘留明顯降低，同時能