1、浙江理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)’I生聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得浙江理工大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：菱磊，為簽字日期：7o∥年雩月，歲日、逝江理工太堂硇堂位論文地盔葒孢枉菌眙臟醛筮醛釜i

2、生優(yōu)化及固定生匕班宜摘要脂肪酶(EC3113)是可以水解長鏈甘油三酯的水解酶家族成員，它是生物催化劑的工業(yè)應(yīng)用領(lǐng)域中非常重要的一員。隨著脂肪酶的作用機(jī)制和應(yīng)用范圍被不斷發(fā)現(xiàn)和擴(kuò)展，微生物脂肪酶已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到洗滌劑、香料、能源、食品工業(yè)、化學(xué)合成、化妝品、生物傳感器、生物降解、酯類及氨基酸衍生產(chǎn)品等諸多領(lǐng)域。絕大多數(shù)工業(yè)應(yīng)用的酶都是通過微生物大規(guī)模發(fā)酵來獲取的，隨著工業(yè)應(yīng)用對脂肪酶需求量的不斷增大，除了通過尋找新型脂肪酶生產(chǎn)菌株及基因工

3、程改造已有菌株外，利用科學(xué)合理的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法對發(fā)酵產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化提高脂肪酶產(chǎn)量或者利用固定化酶來提高酶的利用率也是十分重要的途徑，本研究正是在這樣的背景下提出的。在本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建地衣芽孢桿菌(Bacilluslichenifarmis)胞外脂肪酶Bii02：2：重組枯草芽孢桿菌(Bacillussub／ills)蛋白酶缺失型菌株WB700的基礎(chǔ)上，本研究以該地衣芽孢桿菌胞外脂肪酶表達(dá)菌株為研究對象，利用響應(yīng)面設(shè)計(jì)方法(Response

4、SurfaceMethodology，RsM)對其產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化，利用氨基型載體ZH—HA，對脂肪酶進(jìn)行固定化并研究了固定化前后脂肪酶的基本性質(zhì)。通過RSM進(jìn)行優(yōu)化后得到了最佳培養(yǎng)基成分的配比，并利用該最佳培養(yǎng)基進(jìn)行了10L發(fā)酵中試放大試驗(yàn)，在發(fā)酵進(jìn)行到30h時發(fā)酵上清液總酶活力達(dá)到46U／mL，相比優(yōu)化前搖瓶培養(yǎng)時的173U／mL提高了26倍。利用氨基型載體ZHHA進(jìn)行固定化后，固定化酶顆粒最適反應(yīng)表觀pH在100左右，最適反應(yīng)溫度