1、溫州醫(yī)科大學碩士學位論文答辯委員會主席：j溫州醫(yī)科大學碩士學位論文乳頭狀甲狀腺癌中n r t D l 恨突變的分析中文摘要目的1 ．篩查乳頭狀甲狀腺癌( p a p i l l a r yt h y r o i d c a n c e r ，P T C ) ，濾泡型甲狀腺腺瘤( f o l l i c u l a rt h y r o i d a d e n o m a ，F(xiàn) T A ) 和結節(jié)性甲狀腺腫( n o d u l a r

2、g o i t e r ，N G )患者體細胞線粒體D N A ( m i t o c h o n d r i a lD N A ，m t D N A ) 突變，分析突變在m t D N A 中的分布情況。2 ．比較分析m t D N A 突變在P T C ，F(xiàn) T A 和N G 間的差異，探討m t D N A 突變與P T C 發(fā)生發(fā)展的相關性。3 ．檢測P T C ，F(xiàn) T A 和N G 患者血液及組織標本中m t D N A 拷

3、貝數(shù)，分析m t D N A拷貝數(shù)與P T C 的相關性。4 ．分析P T C ，F(xiàn) T A 和N G 患者線粒體單體型分布，探討線粒體單體型與P T C 的相關性。5 ．探討P T C 患者線粒體單體型及m t D N A 突變與臨床表型的相關性。方法1 ．標本采集：在溫州地區(qū)隨機采集9 2 例乳頭狀甲狀腺癌，2 8 例濾泡狀甲狀腺腺瘤和4 l 例結節(jié)性甲狀腺腫患者冰凍病理組織切片和外周靜脈血。2 ．全基因組D N A 提取：普通光學

4、顯微鏡下辨別并刮取冰凍病理組織，采用T r i s ．S D S ．E D T A 法手工提取病理組織和外周血全基因組D N A 。3 ．P C R 擴增m t D N A 及m t D N A 突變分析：設計2 4 對連續(xù)且首尾相互重疊的引物P C R 擴增m t D N A 全序，P C R 產物直接測序；以修正劍橋序列( r e v i s e dC a m b r i d g e R e f e r e n c eS e q u

5、 e n c e ，r C R S ) 為參考，應用C o d o n c o d eA l i g e r 4 ．0 ．4篩查每個線粒體基因編碼區(qū)和非編碼區(qū)( D ．1 0 0 p 區(qū)) 中的m t D N A 突變及多態(tài)性位點；通過M I T O M A P 數(shù)據庫分析m t D N A 突變造成的氨基酸變化，并通過P o l y P h e n ．2 數(shù)據庫預測錯義突變對其編碼氨基酸結構和功能的影響。4 ．熒光定量P C R ：采

6、用T a q M a n 探針法檢測組織及血液標本中的m t D N A 拷貝數(shù)。5 ．統(tǒng)計分析：應用S P S S l 6 ．0 統(tǒng)計軟件，用卡方檢驗分析P T C ，F(xiàn) T A 和N G 三組間m t D N A 突變及線粒體單體型分布的差異，同時分析m t D N A 突變及線粒體單體型與患者臨床表型之間的相關性( 胙O ．0 5 為有統(tǒng)計學意義) 。結果1 ．9 2 例乳頭狀甲狀腺癌標本中共篩查到5 8 例發(fā)生了m t D N